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标题: 你认为组织块贴壁法和酶消化法培养脐带间充质干细胞哪个方法更好？ [打印本页]

作者: a352167963 时间: 2014-3-18 17:45 标题: 你认为组织块贴壁法和酶消化法培养脐带间充质干细胞哪个方法更好？

作者: bin 时间: 2014-3-19 10:57

组织块贴壁方法简单，但是需要较长的时间才能有细胞爬出，一般需要20天左右可以长满皿底。消化法在前期处理过程比较麻烦，需要2-3小时的消化时间，但是消化后体积大大减小，细胞密度得到提高，原代细胞生长速度快，长满大概1周左右的时间。所以很难说哪个方法好，习惯用哪个就用哪个。

作者: zhangshich 时间: 2014-3-22 09:13

贴壁法简单，细胞长出的慢，个人感觉组织贴壁法培养出的细胞状态更好一些。消化法分离耗时长，培养获得细胞时间要短一些，长时间培养更易老化。

作者: wf78365421 时间: 2014-4-1 16:33

1、组织块贴壁方法简单，但是需要较长的时间才能有细胞爬出，一般需要20天左右可以长满皿底。组织块贴壁法细胞得率高于酶消化法。
2、酶消化法在前期处理过程比较麻烦，需要2-3小时的消化时间，但是消化后体积大大减小，细胞密度得到提高，原代细胞生长速度快，长满大概1周左右的时间。
+ L! b; t' `# @$ M
两者各有各的优势和缺点。

作者: 真水无香 时间: 2014-4-3 15:28

我们用的是组织块贴壁法，虽然细胞爬出的时间比较长，有的甚至需要一个月，不过细胞长的都挺好的。

作者: henryjia 时间: 2014-4-6 21:51

我们比较过两种方法，目前用的是组织块贴壁法，虽然细胞爬出的时间比较长，不过细胞长的挺好。而且少了很多中间环节，感觉可操作性和可重复性较高。

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 10:10

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请问剥脐带时可以不剥最外一层皮吗只取出血管，这样培养出的细胞有问题吗？

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 10:10

回复 zhangshich 的帖子$ Y; f8 L- e' L* c9 E
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请问剥脐带时可以不剥最外一层皮吗只取出血管，这样培养出的细胞有问题吗？

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 10:10

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请问剥脐带时可以不剥最外一层皮吗只取出血管，这样培养出的细胞有问题吗？

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 10:10

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请问剥脐带时可以不剥最外一层皮吗只取出血管，这样培养出的细胞有问题吗？

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 10:10

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请问剥脐带时可以不剥最外一层皮吗只取出血管，这样培养出的细胞有问题吗？

作者: wf78365421 时间: 2014-4-8 11:05

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最外层是羊膜，羊膜中有羊膜间充质干细胞。 x& d" u$ M" V9 m% C+ X( t
可以不剥。

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 18:00

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那血管会分离出什么细胞

作者: bin 时间: 2014-4-9 09:59

回复星空雾雨的帖子$ k' _+ B( l e* W7 d

其实脐带贴壁的话不需要剥皮的，连血管都可以不去掉，直接剪碎就可以，养出来的细胞液很好，但是消化法就另说了。

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-9 10:11

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- q3 ^8 D# i, b
前辈你是做临床的吗效果怎么样

作者: bin 时间: 2014-4-9 10:16

回复星空雾雨的帖子( {8 |& \, b) X# @: `& M
7 d1 m, x1 }/ ^2 `6 M% D; |
我不是坐临床的，我们公司也从事这个工作，用那个方法得到的脐带干细胞纯度很高，就是前期细胞爬出来需要比较长的时间而已。

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-9 10:52

回复 bin 的帖子4 @& t& z# A4 [- s6 e4 W! F

血管会不会爬出成纤维细胞使干细胞不纯影响效果？

作者: wf78365421 时间: 2014-4-9 12:10

回复星空雾雨的帖子( L: U8 W1 T% U# w* O+ h

脐带中血管可以分离出血管内皮干细胞

作者: wf78365421 时间: 2014-4-9 12:11

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脐带中会混入成纤维细胞。而成纤维细胞从形态上类似间充质干细胞。

作者: yanwu_1 时间: 2014-4-9 16:01

我们用的组织块法。一般10-15天细胞就可以传代，然后每隔2-3天就可以传代一次。两种方法各有优劣吧。酶消化法获取的原代细胞要多很多，而且节约时间。大家都说消化会对细胞产生影响，但在我们实际操作中，并没有明显区别。

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-10 17:20

回复 wf78365421 的帖子1 K: c" t, g+ [; n8 m& \: A$ @

成纤维细胞怎么才能去掉

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-4-14 22:01

目前尝试组织贴壁。等效果ing

作者: ss安雅熙 时间: 2014-4-15 23:26

组织块法但是周期长

作者: gd541767393 时间: 2014-4-17 11:33

组织贴壁法，比较简单，对细胞损害性小，就是周期长。酶消化法周期短，2个小时左右就完成，但是由于组织体积不一，所以无法控制消化酶浓度，容易由于消化时间过长，导致细胞损害

作者: dollar007 时间: 2014-5-22 17:15

组织块法：操作简单，养出的细胞活性较消化法更好，但培养周期更长，一般需要15-20天。
消化法：操作繁琐，消化后一般很粘稠，需要稀释过滤，易引入污染，细胞损失也较大。因被酶处理，所以养出的细胞活性较差。但培养周期短，最快的一周时间即可收获。

作者: hefan1234 时间: 2014-5-22 22:29

1.组织块贴壁法操作简单，种瓶前实验操作耗时短，对细胞基本无损伤，一般需要10-12天就可以传代。组织块贴壁法细胞得率高于酶消化法，持续培养可以保持干细胞特性到很高代次。$ e0 u% ^# `3 g" O) a1 w2 E
2 .酶消化法在前期处理过程比较麻烦，需要2-3小时的消化时间，消化过程对细胞损伤大，细胞碎片较多，一般需要5-7天就可以传代，但是持续培养细胞容易衰老。, [+ o. G: z" a4 X9 }6 }1 M l' ^
我认为组织块贴壁法优于酶消化法。

作者: CELL007 时间: 2014-6-12 15:55

关于这个问题，我们做过对比试验的。$ g/ t2 W" s& V+ V7 {8 \% X6 _
组织块贴壁法：操作简单，不需要胰酶消化，对细胞损伤小，大约7到12天就可以长出，我们最快的5天就出来了，然后大约等待5到10天就可以传代了；对于上面大家讲的不纯，主要是外面的皮和3根血管没有去除干净，才会不纯的。/ l+ M6 x c5 y3 _- G: V
酶消化法：对细胞损伤大，大约5到7天就贴壁了。9 ~9 z; q$ i; p
二者相比，组织块贴壁法获得的细胞数量多，而且可传代性强，传到10代时，长势和3代相差不大，我们也做到传至50代的实验；酶消化法，一般到了8代就长的很慢了。

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-6-15 13:18

本帖最后由倒腾细胞于 2014-6-15 13:19 编辑 6 T- K# `0 \, ?& H3 K2 }
" F: y* K" Z6 p. W
培养SD大鼠的BM-MSC是不是比人脐带间充干容易很多呢？不过做了一次就换做老鼠的了...

作者: gzeb 时间: 2014-7-1 09:38

以前做过两种方法的培养实验，培养周期，楼上都说了。现在实验室如果不是时间很紧的话，大都使用组织块贴壁法，好处是显而易见的，过程简单，操作步骤少，不易污染，还有细胞损伤少。大家都知道，细胞处理次数越少，其生长状态是越好的。再者酶消化，时间、消化程度没控制好，就game over了，啥都没了。当然如果是短期内就要得到足够量的细胞，酶消化法吧，速度快是他唯一的优势。

作者: 448922239 时间: 2014-8-1 18:35

组织块法对细胞直接损伤小，元代培养细胞纯度高，简单、经济，但所需培养时间长。
酶解法获得细胞数量大，培养时间短、但细胞纯度略低，细胞可能因为消化的损伤而无法贴壁生长等

作者: tess1029 时间: 2014-9-13 15:14

组织块培养法是一种简便易行、成功率较高的原代培养方法，利用组织块培养法可以将其中一部分迁移能力强的细胞分离出来。+ t$ z. [0 M+ Z& X
相对于组织块培养法而言，酶消化法步骤繁琐，分离成本高，但其能快速分离得到较多的单个细胞，通过短期培养就能得到大量原代细胞。

作者: yaoting111 时间: 2014-9-19 13:26

回复星空雾雨的帖子, G+ ~4 J& @7 v' S6 o3 w
+ o9 u3 I! {7 e
可以，只要静脉和动脉去干净

作者: pcljsw2008 时间: 2014-9-23 14:37

组织块培养周期太长，而且无血清培养基成本是含血清培养基的两倍，而且组织块培养的细胞分布不均匀，我已经用酶消法淘汰了组织块法，周期只有之前的一半

作者: 2013sp 时间: 2014-12-1 15:49

组织块法，较简便，但是也有缺点，就是获得细胞需要等10天左右，如果组织块20天以上才有细胞爬出，细胞会老化，变长、扁平没有立体感、细胞内有空泡。而酶消化法就可在较短时间获得细胞。

作者: chslyx 时间: 2014-12-4 13:49

组织块贴壁方法简单，但是需要较长的时间才能有细胞爬出，一般需要20天左右可以长满皿底。组织块贴壁法细胞得率高于酶消化法。而且细胞质量贴壁法会更高些% ^8 G, X, U1 O: K+ n
酶消化法消化时间不确定，对细胞伤害较大，但是消化后体积大大减小，细胞密度得到提高，原代细胞生长速度快，长满大概1周左右的时间。$ |1 l0 F9 k% s- g
两者各有各的优势和缺点。

作者: 791849046 时间: 2015-3-30 16:08

组织块贴壁方法简单，但是需要较长的时间才能有细胞爬出，一般需要10天左右可以取代组织块，更换培养基。组织块贴壁法细胞得率高于酶消化法。酶消化法时间不好掌握，细胞得率不稳定。

作者: pcljsw2008 时间: 2015-4-21 18:43

个人两种方法都做，组织块法现在已经不用了，酶消速度快，后期就是换液传代，细胞分布均匀，10ml组织块14天就能收到2500万的细胞，而组织块两周才刚刚好传代，只是酶消前期工作量大些，技术要求高些

作者: chenlin080102 时间: 2015-4-29 21:34

我是喜欢酶解法，省时省力，而且5天就能长出很均匀的细胞，半个月能长3代，不会像贴壁法那样出现爬不出来的现象

作者: 丨叶落知秋丨 时间: 2015-6-4 14:14

如果能确保内层贴壁，不剥皮应该没什么影响。可以尝试少放培养液，换液频率增加。

作者: 蜗牛爱贝贝 时间: 2015-7-1 16:57

1、组织块贴壁法相对简单，时间相对长一些，在15天左右就可以看到很明显也比较多的细胞，至于什么时候传代，要看自己的情况不要超过20天以后，那样细胞就有部分老化了、对后期培养不是很好。
2、酶消化法的话，还是要看使用什么酶，消化时间也要看使用的酶种类，不易时间过长，对细胞影响比较大，有时甚至会没有细胞爬出来，这方面没怎么做过，我有个同学做过一次，就没有爬出来# ^( X* a; T t5 ^+ ^2 N: i
至于说不去除羊膜和血管直接培养，个人不是太赞同，虽然都会爬出细胞，但是不同组织爬出细胞种类是不一样的，在加上使用的培养基又大部分是基础培养基，没有针对性，所以细胞纯度很难保证，对后面无论是研究还是临床都有很大的不确定性

作者: woshibotao_01 时间: 2015-7-4 18:49

感觉酶消化法由于消化酶的量问题不好把控对细胞的损伤还是有的，贴块法爬出的细胞比较健康。5 n$ p# }. P1 e/ D
个人偏向于贴块法，省了昂贵的酶，而且对细胞的损伤很小，贴壁细胞形态好，做流式细胞表型很好。
，

作者: stmcell 时间: 2015-7-9 15:47

这两种方法各有优缺点，应该在进一步研究

作者: nkcell 时间: 2015-7-17 12:56

组织块贴壁方法简单，收获的细胞相对来说多些，状态好点，比较容易掌握点，但是获取细胞的时间长点
酶消化法取得的细胞刚开始的时候比较麻烦，但是细胞在一周左右就可以传代，所以二者各有优缺点

作者: 舞时 时间: 2015-7-21 10:09

用过消化的方法没出来细胞组织贴壁倒是可以

作者: 舞时 时间: 2015-7-21 10:11

回复 henryjia 的帖子, i& S! \0 o x( v2 B

贴壁的时候同时加入培养基还是等几个小时再加培养基啊

作者: henryjia 时间: 2015-7-26 18:35

回复舞时的帖子9 G4 t3 O0 T" _7 \& n
+ U0 F" s8 c2 a8 S6 m
贴壁的时候先不要加，静置20分钟待贴牢固后缓慢加入培养基。注意不要直接加在组织块上面。祝好运

作者: tlms1991 时间: 2015-9-11 16:45

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我是最近才观察到组织块有细胞爬出，做了三个皿，其中一个没有去外膜，但是也一样有细胞爬出。所以推测不去外膜也是可以的。

作者: edwardellen 时间: 2015-9-17 17:24

按着我的经验，组织贴壁发培养的细胞没有经过酶类刺激，状态更好，而且对操作人员的要求不高，利于新手分离细胞使用。& D# t, l4 z: t) x2 e. g8 [+ M
但是对解剖脐带的标准要求高，需要把羊膜和血管去除干净，在解剖过程中对无菌的要求高。& o! N( Q; X2 b/ O0 Y
胶原酶的消化会快速获得细胞，但是成本高，细胞经过酶消化处理，如果没有血清，难以贴壁，需要和培养及配套的贴壁添加剂。

作者: 生命单位 时间: 2015-10-13 14:47

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其实组织块贴壁法更好，组织块贴法能获得较为纯净的干细胞，而酶消化法会产生更多的细胞碎片

作者: ywx6302706008 时间: 2015-10-23 20:35

组织块法好

作者: 小云龙 时间: 2015-11-7 20:14

组织块比较好，用酶消化时间上难一把握，对细胞也有损伤

作者: 小云龙 时间: 2015-11-7 20:16

华通胶和那层膜（应该是血管内皮）结合的比较紧密，对取华通胶比较费事，建议还是先去除

作者: 忘虚 时间: 2015-12-2 11:31

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' d7 Y5 D1 R& ~! N% P, ]7 D
外面是羊膜如果不剥的话杂细胞比较多吧。

作者: fjq729587158 时间: 2016-1-21 17:56

回复星空雾雨的帖子: s) V7 p3 L& h8 p) i1 u5 N

最好剥了。

作者: fjq729587158 时间: 2016-1-21 17:58

组织块贴壁法好点，酶消化影响因素太多了，不好掌握。

作者: ghx2005 时间: 2016-1-22 15:10

组织块贴壁法简单，且细胞得率高，相对酶消化法成本低，适合产业化生产

作者: 蚂蚁上树 时间: 2016-1-29 16:41

组织块贴壁法操作简单，但是得到的细胞有时候会比较不纯，而且总体培养时间较长；而酶消化法操作稍复杂一些，但得到的细胞比较纯，但不排除酶对细胞的损伤。对于不同的组织和细胞，应适用不同的方法。

作者: firstaider 时间: 2016-2-2 16:26

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消化法培养两三天就可见单个贴壁细胞，呈圆形或短梭形，培养10 d左右，细胞形态逐渐伸展开来，大体呈长梭形，但少数细胞边缘不光滑，为多角形，不规则，细胞的体积较大，培养2周之后，细胞已逐渐形成漩涡状的集落，且逐渐变大，细胞增多，即可传代。传代后的细胞生长速度明显增快，数量增多，四五天即可传代1次。组织块法培养5 d左右亦可观察到个别细胞沿组织块边缘爬出，呈短梭形、纤细；随后细胞数量增多，慢慢向外扩长，形态类似成纤维细胞，并逐渐形成漩涡状的集落，培养13-16 d，可见细胞集落逐渐变大，细胞增多，即可传代。

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