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标题: 关于悬浮培养癌细胞球中低粘附培养的问题 [打印本页]

作者: sxltc 时间: 2014-3-24 19:45 标题: 关于悬浮培养癌细胞球中低粘附培养的问题

各位前辈，我看了文献中说需要用低粘附的孔板来养癌症细胞以获得细胞球，有的人说可以在孔板底部加明胶效果不错，我想问的是，本身已经是低粘附的孔板了，还需要加明胶吗？还有我们实验室只有低粘附10cm的dish, 我想用48或者96孔板做实验的话，如果不是低粘附的，是不是可以配明胶然后铺在板底，然后起到低粘附的作用？如果可以的话，这个明胶是什么浓度，如何加呢？谢谢

作者: maiweiqian 时间: 2014-3-24 21:42

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低粘附的10cm dish你觉得效果如何？明胶我未试过，琼脂我倒是试过，效果一般般。

作者: 刘慧瑾 时间: 2014-3-25 10:41

1%明胶

作者: sxltc 时间: 2014-3-25 12:38

各位前辈，我又看到说用琼脂糖具体是这样的 pheres of cells grown on FBS were obtained from cells grown on 1% agar layer for 7–10 days with medium change every 2–3 days and isolated from single cells by sedimentation.! }; |5 {: i1 k2 F: ~# Q* j W* t
我现在彻底困惑了

作者: sxltc 时间: 2014-3-25 13:14

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我觉得用10cm的dish养太奢侈了，那些生长因子和培养液很贵的啊~

作者: sxltc 时间: 2014-3-27 13:25

结合我这两天看的东西，我觉得明胶和琼脂糖是差不多的作用，是增加粘附的。一般是养内皮细胞或者胎干细胞时用的方法。可以黏住细胞，我想是不是这样的方法其实有利于做悬浮细胞的免疫荧光，因为可以省去离心的步骤，可以直接在孔板上敷抗体.这样就不会损失细胞.不知道我的理解对不对

作者: leiwang 时间: 2014-3-28 01:15

明胶和琼脂不一样。明胶包被可以增加细胞对培养板的粘附性，琼脂恰恰相反，覆盖了培养板，导致不能粘附或者低粘附。

作者: superlamp 时间: 2014-3-29 21:53

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这样做荧光的话背景会很高的，而且很容易黏上细胞后细胞就不长了

作者: maiweiqian 时间: 2014-3-30 00:22

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想问一下前辈，如果悬浮细胞球做免疫荧光可以怎么操作呢？

我怎么觉得是困难重重啊

作者: superlamp 时间: 2014-3-30 01:19

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用层黏连蛋白铺片子，粘住细胞做爬片，或者把细胞吹散了也行，看你具体做什么了

作者: maiweiqian 时间: 2014-3-30 09:48

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我想做整个肿瘤干细胞球的免疫荧光，但是前辈，那个球怎么才能粘在片子上？如果我到时候用PBS洗或者加什么试剂去通透固定或者染色的时候，球会不会飘起来？前辈有没有什么好建议？打扰您了

作者: superlamp 时间: 2014-3-30 12:01

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先用层粘连蛋白(laminin)将圆形爬片包被后放入六孔或24孔板中，加入细胞球放入培养箱孵育两个小时，差不多悬浮球就粘好了，然后再去做荧光，基本上只要你操作不是很暴躁，球不会脱也不会散

作者: maiweiqian 时间: 2014-3-30 14:18

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啊，原来是这样啊，谢谢前辈指点啦，我回去试试。

作者: sxltc 时间: 2014-3-31 10:51

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师兄我真该早点看到你的提醒啊，我已经铺板了，师兄我想问，我没有低粘附的板，要怎么改进可以更好的得到细胞球呢？

作者: superlamp 时间: 2014-4-9 20:17

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貌似没什么其他好办法，什么铺胶啊，普通悬浮板子啊都试过，效果都不好

作者: KINGxuridongshe 时间: 2014-5-27 00:47

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你好，我最近在做A549细胞成球实验，但是老是出现细胞聚集成团现象，请问这是什么情况？联系试验了几次都是这种情况。

作者: superlamp 时间: 2014-6-25 22:45

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细胞密度太大喽

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