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标题:
大鼠生精干细胞的培养
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作者:
sunny218
时间:
2014-3-27 09:59
标题:
大鼠生精干细胞的培养
各位高手们，我才开始做SSC，做了两次都不是很成功，想向各位高手们请教一下。
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1，要用什么方法去分离纯化大鼠的生精干细胞会比较好？
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2，用什么培养基才能在体外长期培养？
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6 F; _/ _8 p& _8 ^/ U6 G% T! x5 o
' q+ s1 `2 x/ s! r8 n. l- q; O
谢谢各位啦！！！
作者:
490096812
时间:
2014-3-27 13:07
刚开始，你就用普通的就可以
作者:
sunny218
时间:
2014-4-1 08:56
普通的什么啊？DMEM？还是DMEN/F12 ?
作者:
490096812
时间:
2014-4-1 16:29
都行，我们第一种撒
作者:
细胞海洋
时间:
2014-4-2 08:52
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sunny218
的帖子
! m( J( w6 b; n2 h" }+ q r
9 b) n; D$ T$ [0 L+ [ |
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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! v& x* M9 e: t; T5 N
否则他会看不到
7 n4 Y/ h6 j k/ Q! G
作者:
sunny218
时间:
2014-4-2 14:39
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细胞海洋
的帖子
4 j( ~3 [4 X) U
5 i4 O. C& |) u1 Y
好的，谢谢！
作者:
sunny218
时间:
2014-4-2 14:42
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490096812
的帖子
7 a \ E; k, ]5 t \3 b8 ?+ K2 E
w2 [# E& e1 p" q8 n% Z
那你们适用什么方法分离纯化的啊？怎个过程都是要无菌的吧？我可能是不太熟悉，经常会污染，要么就是细胞第二天就都死啦！！！谢谢你的回复啊！！
作者:
w343989328
时间:
2014-4-2 23:59
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sunny218
的帖子
8 s/ s( a: ]. g
& w1 B) _# C: t y' {* J ?( R1 _
为什么会那么容易污染呢？你分原代细胞，培养基里面肯定要加双抗的啊。起码传个一两代再把双抗去掉吧
作者:
w343989328
时间:
2014-4-3 00:16
纯化的话，视你的目的而定。如果只是单纯的建系，而且还处于摸索阶段，那么我建议你用差速贴壁法。这是比较经济的做法，而且现在大鼠SSC的marker尚无定论。SSC的培养体系比较复杂，具体的你可以看点文献再做决定。brinster团队和T.shinohara都是这方面的大牛，Dym Martin也有不少工作
作者:
qingchen
时间:
2014-4-5 23:00
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sunny218
的帖子
, O; k7 B% G% ]6 {8 e' `+ D* m H
4 X( y' q7 m' Q& M, k: ]8 N
两种抗生素没加么？还是液体没有消毒？还是消毒方式有问题？还是操作时未注意无菌？总之污染的因素很多！有时候即使液体有一点细菌的话也会感染的！另外你用什么牌子的滤膜：？滤膜不干净也可能造成污染啊！
作者:
sunny218
时间:
2014-4-8 14:30
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w343989328
的帖子
5 d s- f: k1 X3 {0 M; m0 L6 E0 g. Y
& S3 @* q R) A! t; K5 k6 c# o4 ^
培养基有加双抗哦！！！可能是我操作不够熟练吧！！谢谢啊！
作者:
sunny218
时间:
2014-4-8 14:30
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w343989328
的帖子
8 j% g# g' p# \% d
* N; x. @: ]- o J
好的，谢谢！！！
作者:
sunny218
时间:
2014-4-8 14:31
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qingchen
的帖子
/ u9 J$ j @/ \
0 ?; H0 M1 P6 w* E, v# H9 R
我也是这么认为的！！谢啦！
作者:
sunny218
时间:
2014-4-11 11:35
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w343989328
的帖子
- S3 \0 f0 t& k# K4 H
6 D) F- u2 [7 j# R7 |/ A
谢谢您的回复！！可以给我几篇他们相关的文献吗？
作者:
w343989328
时间:
2014-4-11 20:40
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q# }+ b4 L* Y5 \2 }/ `
给你没问题，但你自己最好学会去搜他们的文献看
作者:
sunny218
时间:
2014-4-14 10:59
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w343989328
的帖子
, ?1 u" P+ P9 _( Z. q2 w" M
9 X5 i, o2 i2 \% ]1 ^
太谢谢你啦！！！
作者:
qingchen
时间:
2014-4-25 20:32
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sunny218
的帖子
- p. O2 e6 s* ?3 m0 \4 |0 c
# Z9 h) j1 Q0 V# d
培养的怎么样了？这次注意无菌没有？成功了没？
作者:
1053616229
时间:
2014-5-21 11:06
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sunny218
的帖子
% N U( a) \ d$ U( H9 G/ t1 s! m- v
$ J9 A, }! R4 L, |* ^
你是单纯做培养吗？
作者:
1053616229
时间:
2014-5-21 11:08
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sunny218
的帖子
* Q0 n8 w- d, h* X' j- ]" Z7 |
0 X7 x3 {* M6 q9 x
还有一个问题，你选用的大鼠是多大周龄，精原干细胞开始分化了吗？ 如果没有的话，你就用差速贴壁的方法纯化就行。
作者:
sunny218
时间:
2014-6-11 08:37
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1053616229
的帖子
! M7 Z" q, M, X% }
* V( x: O F6 ^9 d
用的是一周龄的大鼠！培养之后还要做一些转染的实验。有什么需要注意的吗？谢谢！
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