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标题: CIK细胞培养，接种量少，能长起来吗 [打印本页]

作者: momoenn 时间: 2014-3-28 19:41 标题: CIK细胞培养，接种量少，能长起来吗

今天分了一份血，只有3.4X10^7个单个核细胞，接种密度为2X10^6个/ml。还能长起来吗？4 H/ I9 L1 Y1 Q; e) c( s
以前实验室培养这样的量少的细胞，都是前期细胞状态挺好，但后期增殖不行。但愿这次能长起来。
大家给指导一下看看需要注意哪些问题？比如说补液的比例什么的

作者: 漂泊的风 时间: 2014-3-29 08:18

应该可以的，只不过要达到需要的数目需要的时间比较长

作者: zhrt 时间: 2014-3-29 09:50

应该没有问题！你采的什么血样

作者: momoenn 时间: 2014-3-29 14:35

回复 zhrt 的帖子3 b/ _$ _' P9 H
! @" p |4 C; t7 R$ C# N+ e P3 Z
脐血，之前培养的两份接种量少的反正增殖不好。这次培养的这份挺重要的，希望一切顺利

作者: zhrt 时间: 2014-3-29 15:21

用的什么培养液及因子

作者: momoenn 时间: 2014-3-29 16:50

回复 zhrt 的帖子7 I* s2 ]3 o& V9 i. s, a1 k: n
5 K8 c# t0 `, L4 o% k! f. N' r8 D
X-VIVO15,因子是IFN-a。

作者: momoenn 时间: 2014-3-29 16:53

回复 zhrt 的帖子& s V: i! k& {. y+ D
; x8 b: K; f, L1 x, V5 Z
今天是接种后的第一天，添加CD3和IL-2后，混匀，出现了絮状物。这是啥情况啊？

作者: ccst4838318 时间: 2014-3-30 00:48

大概是蛋白稀出物，来源可能出至用的血清，或者裂解的细胞，对细胞培养应该没多大影响

作者: xxue311 时间: 2014-3-30 09:09

因子用IFNγ要好些。

作者: zhrt 时间: 2014-3-31 11:29

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γ-干扰素好点

作者: zhrt 时间: 2014-3-31 11:34

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絮状物肉眼能看到吗？我们培养的是外周血的，细胞裂解，细胞的碎片，血红蛋白可能会导致絮状物，只有在显微镜下可以看到，如果不是大量的话养养可能情况会好转

作者: luyue6453 时间: 2014-3-31 15:20

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要看絮状物是不是细胞团，如果是细胞团就丢弃吧，后期细胞站不起来的，而且絮状物越来越多，吹都吹不散的都是死细胞了，跟你操作没有关系，就是个人体质的事，如果絮状物不是细胞，那样没关系的，是蛋白析出，你把它吸出来就可以了，然后重新补因子，最好不用自体的血浆培养，会经常出这样的情况。

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 09:39

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脐血也会出现这样的问题吗？昨天是培养的第三天，大的絮状物消失了，但是肉眼依然可看到细胞团。台盼蓝计活率只有90%。培养基颜色变黄

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 09:39

回复 zhrt 的帖子3 z8 v+ ^9 n+ h

能看到

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 09:41

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7 z3 c* Q* [* ?$ j! _4 Z
会不会是我直接在培养瓶里添加的因子造成局部因子浓度过高，引起的细胞聚团或死亡

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 10:26

回复 momoenn 的帖子2 @- I# p, o4 c
4 `$ x$ @, u( B: Y
细胞因子只要混匀应该没问题，用的什么抗凝剂？

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 14:12

回复 zhrt 的帖子0 r! r$ }4 e& o8 _
& x' s1 z- c: J3 _$ L8 v- a
枸橼酸钠。商品抗凝剂，血液保存液III

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:21

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( `5 t; W- Q( y
枸橼酸钠能有培养液中钙离子结合，影响细胞生长的。我们都用肝素钠的

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:26

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论坛提问回答集锦

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:30

回复 zhrt 的帖子1 R% S3 X- u: j$ A/ `8 p

论坛提问回答集锦' S6 B2 u# g2 V1 v
http://www.stemcell8.cn/thread-70491-1-1.html
，抱歉我也是刚看到有着链接，所以给你多发了几遍

作者: momoenn 时间: 2014-4-1 16:31

回复 zhrt 的帖子% C5 \" I& z, I: O8 W8 [6 O; ^
4 W7 w0 V, `; Y5 V+ e, y3 L Q0 c
额。今天和实验室前辈交流时发现，可能是因为培养前几天，有些细胞还是贴壁的，然后我用吸管吹打混匀了，可能对细胞造成了伤害，所以才会补液后看到很多絮状物。3 q5 H# K' S, T. ~, r5 T
细胞已经这样被我折腾了三次了，你一定要挺住啊。

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 16:49

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找到原因就行

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 08:42

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我这个絮状物可能是由于我用吸管吹打造成的（前期细胞贴附性强一些），也长不起来了吗？

作者: aochongyu 时间: 2014-4-2 09:40

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$ a3 S4 F, o4 U3 k1 P
个人感觉一般吹打不会使细胞产生絮状物，估计就是蛋白析出或者密度过大产生聚团现象吧

作者: 草胞 时间: 2014-4-2 09:47

正在生长的细胞，一般轻轻吹打，不会对细胞产生很大的损害啊。絮状物也有可能是细胞都长到了一起啊

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-5 16:46

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请问CIK多久可以把癌细胞杀灭干净

作者: yangpan521 时间: 2014-4-7 21:55

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* K+ y1 I" u L# K4 z/ x
想问一下如果是抽病人的血液来培养，出现这种情况就扔掉，那对病人怎么交代？

作者: yangpan521 时间: 2014-4-7 21:57

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血浆有没有灭活呀，为灭活的血浆会出现纤维蛋白，粘连细胞，

作者: 漂泊的风 时间: 2014-4-8 08:47

回复星空雾雨的帖子" i! G* C: g: |2 w; ^- M

理论上，CIK杀伤肿瘤细胞是通过激活体内的免疫系统实现的，而体内免疫系统的杀伤能力是与体内肿瘤细胞的多少有关的，所以对于细胞CIK多久可以吧癌细胞消灭干净这个问题不太好回答，要看你癌的阶段，是否已经大范围扩散，一般而言对于癌症早期CIK治疗效果还是挺明显的，到中晚期只可能延长寿命，不会彻底治愈。

作者: luyue6453 时间: 2014-4-8 13:12

回复 momoenn 的帖子/ m' b4 L) [9 c$ ~) U3 H1 H

用移液管吹了应该没问题吧，但是真是细胞絮状物我觉得细胞都快死了，你养养看吧，

作者: luyue6453 时间: 2014-4-8 13:16

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0 o+ D3 d' `* W& p
可是细胞一直聚团形成絮状物，本身不增殖，你养着有什么用，然后这样的细胞你就敢给病人回输，如果聚团一吹就散了，那说明细胞活性可以，但是吹都吹不散的细胞那就是要死了，你这样回输对病人更没办法交代。出现这样的情况，不一定是操作者人为造成的，可能是血液本身细胞就有这样的特性，所以应该和病人如实交代，难道这个还用问。

作者: yangpan521 时间: 2014-4-8 16:05

如果絮状不多，可以过滤后再计数和测活性，

作者: momoenn 时间: 2014-4-9 13:13

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5 d6 p7 |& u5 \! \& [1 S9 }
活过来了，现在状态啥的都挺好的

作者: momoenn 时间: 2014-4-9 13:53

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没有用血浆

作者: chang-514 时间: 2014-4-9 14:56

絮状物培养一段时间就会散开的# N- q* z* o1 l

作者: momoenn 时间: 2014-4-16 08:33

回复 chang-514 的帖子0 X" W/ e1 L7 H& I9 S% l

是不是细胞团到一定阶段会散开啊，絮状物也会吗

作者: chang-514 时间: 2014-4-17 21:16

回复 momoenn 的帖子3 C7 e( e$ \' o% S0 s" B6 M+ F( e
1 L6 n" t3 h/ t! B2 @ c
大多数情况会，不过也有些到发放时还没完全散开

作者: shamoye 时间: 2014-4-25 16:37

回复 luyue6453 的帖子0 O8 }9 w# ]$ L3 j( {6 R/ K& e' a- I
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这个不一定吧？细胞聚团培养一段时间还是可以的就是长的慢

作者: gd541767393 时间: 2014-4-28 08:47

应该没问题，以前我们接种也是这个数，长的还行，细胞因子也是一样，还加了白介素2，添加点额外的血清会更好

作者: chenguangyu 时间: 2014-7-8 07:52

3.4✘107不少了，可以长起来

作者: chenzhengliang 时间: 2014-7-10 17:06

一般20M（2.0✘107）的细胞量就可以长起来了，一定要保证铺板密度，1M/ml最为适宜；若只有二三十毫升用T75培养瓶养的话，刚开始最好保证培养瓶竖着放置，这样细胞会长得快一些。

作者: zhanglu8677 时间: 2014-7-11 11:19

应该问题不大，以前也养过类似的，前期增值慢，后期就长上来了。还长的挺好的

作者: zhanglu8677 时间: 2014-7-11 11:19

应该问题不大，以前也养过类似的，前期增值慢，后期就长上来了。还长的挺好的% b- _- n# `: l: Y" a

作者: yanglixia 时间: 2014-7-31 08:49

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$ q9 ~; n/ n4 h; h( w. \( U* b
3*107应该能长起来的，不少了，你要培养几天呢，我知道培养11-15天是没有问题的8 ?7 y( ~' A1 `6 M% A, A
如果细胞量再少的话就可以加点FBS促进一下，就能长好了

作者: yanglixia 时间: 2014-7-31 08:51

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你是用什么包被瓶子的，脐血时很容易出现絮状物，如果团块很大，可以吸出，小就不用管，不影响后期的生长的

作者: 指下人生 时间: 2014-8-8 07:58

回复 momoenn 的帖子0 B) P6 W8 v+ D% j3 h0 G4 k
8 j* _+ Z' {+ A0 P q5 N6 T
这个密度已经很大了，我们培养接种密度一般是1*10*6左右都长得非常好，后期补液根据细胞数和培养基颜色判断最好，我们实验室一般不换液。

作者: momoenn 时间: 2014-8-8 08:20

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请教一下，自体血一般不会出现絮状物吗？

作者: 张源 时间: 2014-9-2 10:09

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白介素-2我们都是接种第二天才加的

作者: 张源 时间: 2014-9-2 10:10

γ-干扰素是能接种是加的 CD3包被时加

作者: 骑驴看美女 时间: 2014-9-2 16:53

使用培养瓶养的吗？

作者: 细胞海洋 时间: 2014-9-3 08:05

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; B/ R7 H0 i: M( S
你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样

否则他会看不到

作者: 骑驴看美女 时间: 2014-9-3 15:33

受教了，谢谢！

作者: momoenn 时间: 2014-9-9 08:16

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接种用培养瓶，后期转袋

作者: chenguangyu 时间: 2014-9-16 13:26

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因子用错了，用ifn-伽嘛

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