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标题: PBMC提取 [打印本页]

作者: zhrt 时间: 2014-4-1 15:29 标题: PBMC提取

提取PBMC分层中会有脂肪细胞吗？红细胞层与分离液之间的像絮状物一样的东东是脂肪细胞吗？有时提取的PBMC中也少量含有这种类似物

作者: Andyhigh 时间: 2014-4-2 08:00

本帖最后由 Andyhigh 于 2014-4-2 08:02 编辑 8 N! M) G( T4 d% m6 B8 d" i: d

zhrt 发表于 2014-4-1 15:29 9 O9 g( T, E1 ]8 _& M# c
提取PBMC分层中会有脂肪细胞吗？红细胞层与分离液之间的像絮状物一样的东东是脂肪细胞吗？有时提取的PBMC中 ...

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这是我们分离的结果示意图，你是说红细胞（最下面一层的细胞）与分离液之间的像絮状物嘛？这个不影响实验结果啊  [attach]60361[/attach]4 ?, m* X  ~9 g/ w! \, H" c
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从上往下三个箭头依次代表血小板及膜结构，淋巴细胞，  红细胞  图片上传出了点问题！！！2 h$ H$ T$ h9 J' j
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作者: zhrt 时间: 2014-4-2 08:08

回复 Andyhigh 的帖子4 S. f6 F0 j7 k; B, J, g% A X3 s
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你提取的淋巴细胞怎么这么黄？我说的是红细胞的上表层贴着红细胞的表面有絮状物，有时很少量的参杂在淋巴层

作者: 490096812 时间: 2014-4-2 08:40

大神，你用的什么基质啊

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 09:13

回复 Andyhigh 的帖子 n/ H" v: g0 `* @% _+ n# X6 m5 i

白膜层怎么颜色那么深？最上层的红色液体是什么啊

作者: zhrt 时间: 2014-4-2 09:23

回复 490096812 的帖子$ x% }1 q4 V, Y+ i* v$ V
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外周血

作者: aochongyu 时间: 2014-4-2 10:25

回复 Andyhigh 的帖子! l# |1 _1 f- x$ Y

请问您这怎么多了一层啊？最上层红色是什么啊

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 11:55

回复 zhrt 的帖子

是怎么样的絮状物啊？我上次分离也是最底层的红细胞上表面附着一层白色的细胞层，我以为可能是因为铺层完离心降速度过大，把白膜层也离下去了，下次决定调整一下离心降速度试试呢

作者: zhrt 时间: 2014-4-2 13:59

回复 momoenn 的帖子7 r7 X1 B" g1 G3 Z& q
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白色成团的絮状物

作者: 真水无香 时间: 2014-4-2 15:46

我们的也会出现这种情况，很多次了，有时像是颗粒状的物质，不知道是什么。第一步分离血细胞和血浆后，血细胞层的表层也会有白色的絮状物

作者: Andyhigh 时间: 2014-4-2 18:59

本帖最后由 Andyhigh 于 2014-4-2 19:03 编辑

zhrt 发表于 2014-4-2 08:08
* t- l1 ^  J- J% p% W! U5 R3 r回复 Andyhigh 的帖子
# b1 G; i0 A' y1 A  Y
; Z6 E  ^/ v0 T4 p* x你提取的淋巴细胞怎么这么黄？我说的是红细胞的上表层贴着红细胞的表面有絮状物，有 ...

' }6 |( i) |! w. k. u3 T9 M+ n" M

本来是红色的，手机拍完就变成这样了；今天又做了一次，再上传张图片瞧瞧。[attach]60398[/attach]

你说的可能是脾脏压碎后的组织碎片，细胞碎片，或者老化的淋巴细胞之类的混合物！

作者: Andyhigh 时间: 2014-4-2 19:08

本帖最后由细胞海洋于 2014-4-3 14:05 编辑

490096812 发表于 2014-4-2 08:40
/ ^; J0 H) V5 f! |大神，你用的什么基质啊

! H3 L# S/ w( \6 |' s8 S
Percoll，最近看着有一篇文章说的PBMC的提取，不过用的不是这种基质！[attach]60399[/attach] ?, j6 Q% R2 r3 q% V' ?* Y
. ` Y+ j7 E" J5 P0 B
你可以参考本论坛的另一个帖子，有我的评论. H) F6 ]! c7 O( @8 U! p2 ~
链接 http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... t-%D6%B8%BC%E2.html

作者: Andyhigh 时间: 2014-4-2 19:16

回复 momoenn 的帖子
) v! X2 F: h% k- i7 `0 g$ h
中间的白膜层是红细胞和淋巴细胞的混合物，此时还没有用红细胞裂解液裂解；
最上层的液体是自己加的1ml细胞培养液，根据自己的经验，这样离心的效果会更好点！！！2 \# @$ d% Y- Z+ f) y/ Z

作者: Andyhigh 时间: 2014-4-2 19:18

回复 aochongyu 的帖子3 Q2 |! b7 A7 m$ N
- }' q3 q3 S$ A: e/ `; o- Q2 M' ~
自己加的1ml细胞培养液，这样做的目的是离心效果更好！

作者: Andyhigh 时间: 2014-4-2 19:20

回复 momoenn 的帖子5 y2 j9 w/ I# z* p
. B) O) f7 u% i2 V. f
用密度梯度离心，我知道的情况是离心机的升降加速度都必须为0啊，且此时离心为室温，不然后影响分离结果，而洗细胞和操作时，最好在冰上操作，以保持细胞的活性！！！

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 21:32

回复 Andyhigh 的帖子, C% t4 Y% x a- O% k, a

升降加速度最小是1吧？但是那样太慢了，可以做实验找一个最合适的加速度的。

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 21:35

回复 Andyhigh 的帖子
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奥，你用的percoll，那就不了解情况了。我们用ficoll，白膜层没有出现过红细胞呢

作者: momoenn 时间: 2014-4-2 21:38

回复 Andyhigh 的帖子

奥，这样啊。因为你用的percoll，不了解情况。我们用ficoll，白膜层没有混杂过红细胞。说一下我自己的分析哈，探讨一下，因为percoll和ficoll分离都是密度梯度离心法，红细胞和淋巴细胞密度不一样，不应该在同一层啊。

作者: zhrt 时间: 2014-4-3 11:56

回复 Andyhigh 的帖子

亲，我做的是用外周血培养cik啊

作者: zhrt 时间: 2014-4-3 11:58

回复 momoenn 的帖子1 f- E1 X) H& L
# n- _4 k0 W$ ?8 F
我们也是用ficoll白膜层

作者: zhrt 时间: 2014-4-3 12:00

回复 Andyhigh 的帖子8 W! \$ }: X4 B* J) I- o
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我们分离出来分四层，从上往下依次是血清，PBMC层，ficoll分离液层，红细胞层

作者: zhrt 时间: 2014-4-3 12:01

回复 Andyhigh 的帖子# J1 c7 J2 R/ b

如果血脂高的话，提PBMC有啥影响

作者: zhrt 时间: 2014-4-3 13:21

回复真水无香的帖子

是的是的，不知是什么

作者: eeel 时间: 2014-4-3 15:52

zhrt 发表于 2014-4-1 15:29
* K% s+ O6 e3 M1 s: L% J提取PBMC分层中会有脂肪细胞吗？红细胞层与分离液之间的像絮状物一样的东东是脂肪细胞吗？有时提取的PBMC中 ...

你说的这个东西是有的，特别是大量外周血分离的时候很明显，从上往下看的时候看的特别清楚，这个根据细胞密度来看应该是粒细胞巨噬细胞之类的白细胞，PMBC的分离效果跟离心力、离心时间以及升降速时的加速度的关系比较大，具体参数需要根据具体的离心机和分离液来确定。过了收获的PMBC就明显比较少。

作者: zhrt 时间: 2014-4-4 09:27

回复 eeel 的帖子$ p7 g1 F4 u1 Z4 N( K) t0 Y8 p

真是非常感谢啊！这东西如果参杂在白细胞层降不下来，会有啥影响（有时还参杂点微量的血细胞）

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