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求助:大家在养ips细胞的时候有没有碰到有这种形态的,我现在真的养不下去了。。。
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作者:
lion1987007
时间:
2014-4-5 12:04
标题:
求助:大家在养ips细胞的时候有没有碰到有这种形态的,我现在真的养不下去了。。。
如题,我在养ips细胞的过程中有时突然出现这种形态的细胞,而且一出现很快整盘细胞都会变成这样,这样的细胞克隆不仅形态差,而且细胞克隆很难长大,传到基质胶上时会好一些,但是还是没有以前的增值速度,而且是不可逆的,一旦出现了这种形态的细胞,这批ips细胞就基本报废了,请大家帮我分析分析是什么原因?你们在养ips细胞的过程中有没有碰到过这种情况?[attach]60463[/attach][attach]60462[/attach]
作者:
wanglimaomao
时间:
2014-4-5 18:53
有可能支原体污染,一般支原体污染,细胞增殖减慢,细胞状态差,但培养基不会有变化。加一些抗支原体的药试试。
作者:
922922922
时间:
2014-4-6 17:50
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lion1987007
的帖子
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* I1 R1 v; z7 z2 m
一方面有可能是污染,但是也可能是分化了。我的IPS里面有时偶尔会有这种情况,但是不影响其他形态好的的克隆生长。如果怀疑是支原体污染,可以检测一下
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作者:
henryjia
时间:
2014-4-6 21:48
你用的什么滋养层细胞?似乎滋养层细胞在大量死亡,至少形态不健康
作者:
芦苇浅
时间:
2014-4-6 22:15
你们的feeder是iMEF吗?好稀啊,我们养ES或iPS时候iMEF的密度要比这大得多才能支持细胞克隆的生长。
作者:
陆萌
时间:
2014-4-8 09:36
感觉MEF有问题呀,一般按60000cells 每平方厘米的密度种滋养层细胞~~
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作者:
Tivah
时间:
2014-4-8 09:53
连feeder带iPS的状态都有点怪,要形容的话好像拿什么固定剂固定过了似的……不过楼主既然说传到基质胶上时会好一些,那可能就是feeder有问题了。
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& J9 d: }% w M7 ?
另:楼主具体检测过这样状态的iPS吗?比如用qPCR测几个marker(或者直接用的oct4-gfp的MEF)?
作者:
plainxie192
时间:
2014-4-8 10:08
做个支原体检测看看吧,如果真污染了,直接扔吧,药物也只能起抑制作用,不能完全杀死,注意培养基是否有问题。
作者:
lion1987007
时间:
2014-4-9 09:45
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Tivah
的帖子
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4 d+ k9 f P: r
这个克隆我们之前已经做过ips鉴定了,确定是正常的ips克隆,开始的时候形态很好,只是突然有一天才发现这种形态的,所以我怀疑是不是污染,但又不像是细菌污染。。。
作者:
lion1987007
时间:
2014-4-9 09:48
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芦苇浅
的帖子
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4 ]: S1 b$ W9 w$ J9 J
我们用的是CF-1品系小鼠的MEF,开始接种的时候其实不稀,但是出现这种形态的克隆后,感觉MEF也死了不少,形态也不好了。。。
作者:
碧螺春的秋天
时间:
2014-4-9 09:51
克隆看上去有点黑乎乎的,而且听你描述的挺像是污染了,增殖变慢,不可逆,会导致整盘ips异常。检测下支原体吧,如果真是污染就全部扔掉然后做好灭菌,防止后面的实验还会污染
作者:
芦苇浅
时间:
2014-4-10 10:33
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lion1987007
的帖子
+ j1 L/ k M" e3 D7 v
- G+ {: Q" T) r0 T* W3 Q/ B- u
对,培养ES过程中iMEF是有一定消耗的,如果当ES还达不到传代要求但是iMEF比较稀的时候有两种补救方法。一种是直接收集培养iMEF后产生的ES medium,然后补加到培养的ES中,另一种就是解冻iMEF并向ES中补加一定量的iMEF,从而达到支持ES生长的状态。你可以试试
作者:
葱葱
时间:
2014-4-11 00:23
我养了好久了,一直没培养出iPS,这段时间又出现焦虫了!哎!你的还不错。至少有克隆了!而且是阳性!我之前养饲养层时,ES培养基加进去后饲养层细胞有死亡,后来发现配液有问题,你是否换了培养液了呢?可以考虑一下配液!这是我的建议!另外你能否把克隆初期的照片发给我一张,我想参考一下!
作者:
Serene
时间:
2014-4-23 14:25
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lion1987007
的帖子
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/ K' f" N! x7 N# u
你好,我想问下,你们用的饲养层是直接买的么?还是自己提去的胎鼠,要是自己提取MEF的话,使用前要做什么检测么?
作者:
shushiqing2003
时间:
2015-1-7 02:05
我觉得这个feeder密度不稀啊
作者:
碧螺春的秋天
时间:
2015-1-7 08:26
可能是支原体污染,建议检测一下
作者:
ciweiyuan
时间:
2015-1-7 09:19
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Serene
的帖子
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! J% ]; a' t3 }
要做支原体检测的
作者:
wangxiang
时间:
2015-1-7 16:26
1.可能是支原体污染,建议买个kit检测一下。2.feeder体系培养的话细胞形态好坏很看MEF的品质,你这个铺底的MEF看起来有点问题,而且也有点稀疏了吧。3.既然克隆鉴定没有问题,建议转到feeder-free体系里面去养。你这是什么来源的ips呢?
作者:
shushiqing2003
时间:
2015-1-20 10:27
我觉得就是长老了。。这是养了多少天的细胞啊?。。
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如果不行就重新接种一次。。我有时候也会出现这样的情况。。
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但是重新接种就好了。
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作者:
cloudycity
时间:
2015-2-3 15:51
好像是分化了,之前也遇到过这种情况,强制挑出来放基质胶上培养,分化好多,不过还是可以慢慢筛···
作者:
chenyinan0214
时间:
2015-10-16 23:08
我也是这种情况,这样的iPS根本没用,几天就死光了
作者:
无涯
时间:
2015-11-3 10:10
你这个克隆是人的iPS吧,支原体污染的可能性比较大。还有,人iPS培养基中含有bFGF,bFGF对MEF本身会有一定的伤害,MEF的状态会变差。并且,人iPS接种的饲养层密度要求应该比鼠的iPS低很多,一般1.5万/cm就做够了,多了反而不好
作者:
五仁
时间:
2017-4-10 20:55
看着feed密度稀少,如果铺入的feed量对,有可能是bFGF因子量太多,可以试试降低这个因子的量,可能会有改善
作者:
吃呆猫
时间:
2017-5-17 16:21
我觉得很正常啊,就是刚seed下去的时候是大团快,然后就会成这样,一般大克隆会死,但是周围会长出小克隆
作者:
时一清
时间:
2017-5-20 13:37
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Serene
的帖子
- y/ K! ^# [2 d; E8 d1 }6 X, M; P+ G% R
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支原体检测
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