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标题: 脐带间充质剥离 [打印本页]

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-6 15:25 标题: 脐带间充质剥离

剥脐带时可以不剥最外一层皮吗只取出血管，这样培养出的细胞有问题吗？

作者: henryjia 时间: 2014-4-6 21:09

外皮应该是上皮细胞，肯定会对提取的细胞有污染。另外一只怀疑脐带提取的所谓干细胞有很大程度上是被成纤维细胞污染了。
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在此顺便问一下，有没有区分标记成纤维细胞的有效方法。特别是从MSC中去除的方法。试过免疫磁珠但不是太好。, _3 b6 g+ D1 |2 H4 Y! e! _

祝好运！

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-8 09:58

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你说的成纤维细胞是从哪里分化出来的是从外皮吗？

作者: lql2006wh0 时间: 2014-4-9 10:05

回复星空雾雨的帖子7 f6 @% ~4 _' o, T- [

没事。经过2-3次传代就纯了，你可以用流式做下。

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-9 10:13

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流式查哪几种细胞达到什么数量算可以

作者: 2013sp 时间: 2014-4-9 11:00

不剥离脐带的外皮羊膜，也能得到脐带间充质干细胞。剥离外膜会比较麻烦，需要耐心，但剥离外膜后培养出的细胞会更纯。

作者: 听不到 时间: 2014-4-10 09:33

不用剥外膜，去血管后，直接往下撕胶就行，撕成一条一条的，然后剪碎

作者: zhangjieyctc 时间: 2014-4-10 09:51

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可以的，国外都是不剥离的，外皮不是上皮细胞而是羊膜，所以爬出来的也是间充质干细胞，做各种检测、流式都没有任何影响的

作者: zhangjieyctc 时间: 2014-4-10 09:54

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阳性：CD73、CD90、CD105 阴性：CD34、HLA-DR，阳性标准在95%以上，一般做出来都是98%、99%左右，阴性5%以内，一般都是2%以内的

作者: henryjia 时间: 2014-4-11 07:14

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难道羊膜最外层细胞不是上皮细胞吗？我的实践经验是必须剥离外皮，开始操作有点难，但是三两次也就熟了。加上脐带很长，练一两根也就会了。不能省略必须的步骤！

作者: yanwu_1 时间: 2014-4-11 08:47

问题不大。传代后流式检测，可以达到正常值，95%以上。

作者: 月_幻影 时间: 2014-4-11 13:13

不剥外皮也可以的，不会有很大的影响，只不过会出现一些杂细胞。。。不过我们这边做的时候都是将血管去掉后直接夹着羊膜从上面往下撕华通胶，不用专门除去，其实也不麻烦的。。。

作者: 无情95至尊 时间: 2014-4-11 13:35

我们实验脐带最外层羊膜上皮细胞必须剥掉的！我看过有的论文里没有剥掉，加了某种细胞因子之类的抑制它生长什么的。剥脐带是很繁琐的剥一根要个把小时，不过剥过几次后就能掌握技巧，我直接先剥表皮，像剥龙虾尾部一样。我觉得最难的是静脉血管了容易破，还得剥干净不然影响细胞培养！大家讨论讨论心得呗

作者: weijunning 时间: 2014-4-11 13:55

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我们的实验证明：不用剥离外皮也能得到很纯的脐带MSC。有流式结果大力支持。

作者: henryjia 时间: 2014-4-12 05:03

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不要被流式细胞检测结果迷惑，那只是表面抗原，并不具有特异性。要证明是MSC，多分化潜能试验必不可少。需要做成指，成骨，软骨测试。

作者: weijunning 时间: 2014-4-14 11:32

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f非常感谢你的建议！我们也正在做分化鉴定，起码流式检测结果事先给我了做下去的信心。

作者: lql2006wh0 时间: 2014-4-14 12:59

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流式的话要至少达到95%，两篇文章，可以看下，时间太长不记得了，我这好像也没全文，只有摘要。& o" w0 H: a& B4 ^
①Cytotherapy. 2005;7(5):393-5.
Clarification of the nomenclature for MSC: The International Society for Cellular Therapy position statement.
②Cytotherapy. 2006;8(4):315-7.4 |" {+ K' M! U F
Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-15 08:42

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哪个细胞达到95%

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-15 08:44

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分化的话时间太久怎么才能更快的检测出来是不是MSC，还有脐带不剥外层皮有没有影响

作者: lic126 时间: 2014-4-15 10:50

起码我们是不剥表皮的。。。传到P1后流式结果已经能达到95%以上。。。并且部分标本在P4也做过相关的成骨成脂的分化检测，结果也相当不错。。。所以我们的实际操作经验是不用剥离表皮。就剔除了动静脉。

作者: 2013sp 时间: 2014-4-17 09:58

脐带外表皮如果一点一点撕去，费时又费力，我认为可以采用止血钳撕胶的方法，即剥去动静脉后，采用止血钳将华通氏胶一条条撕去，这样可以很容易将胶撕去，只留下脐带表皮。

作者: haibara007007 时间: 2014-4-17 16:34

不剥离也可以，不会影响，但前几代消化提纯就比较重要了

作者: henryjia 时间: 2014-4-20 06:23

回复 lic126 的帖子0 B5 P3 d- r0 \

请问你们用的什么培养基？我试验过几次，似乎成指成骨分化很差

作者: 星空雾雨 时间: 2014-4-20 10:17

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怎么消化提纯？

作者: lic126 时间: 2014-4-21 09:27

回复 henryjia 的帖子; g+ I ~. E* x1 ]1 d& ~0 `
. p* r0 y+ j7 D9 r" ]# K
就参考相关文献，自己配置的相关诱导液。

作者: 龟酱 时间: 2014-4-23 17:10

回复无情95至尊的帖子
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我觉得剥胶比剥静脉难啊，静脉还算比较独立于胶的。。只要夹着露出来的血管的根部一点点往下剥一般都能分离出完整的静脉，可剥胶一不小心就会撕坏羊膜层，而且剥下大块的胶后很多胶与羊膜层贴的很紧很容易连着羊膜层一起撕下来而且还费时间。。剩下的还舍不得扔有种鸡肋的感觉。。。我们实验室现在都不撕胶了直接带着羊膜剪。。。不知道到P3能不能纯点

作者: henryjia 时间: 2014-4-27 02:21

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我觉得做分化试验更好些，成指，成骨，成软骨。这三项简单易行! C9 g0 G1 A% Q# @$ o

作者: Demon_CN 时间: 2014-5-13 10:34

理论上也是可以的，
这样的做法有点缺点，提取出的细胞不够纯。流式结果会有一定的影响
我们实验室都是去静脉和两条动脉，
然后将胶从膜上分离出来

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