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标题: DC-CIK细胞培养 [打印本页]

作者: zhangjieyctc 时间: 2014-4-9 10:46 标题: DC-CIK细胞培养

最近实验室想开展免疫细胞培养，求助DC-CIK细胞培养过程，以及培养基等试剂，具体点，求大神。。。

作者: 金华 时间: 2014-4-9 12:49

DC培养用细胞因子：
nGM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)：
GM-CSF是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成，并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细胞因子之一。

GM-CSF在DC培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化，细胞表面MHC II类分子的表达得以提高，从而增强细胞的抗原递呈功能。此外，GM-CSF还可促进DC的存活。# k& G5 X" ]8 C: _- e3 h8 t7 j
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nIL-4 (白细胞介素-4)8 s `# B, N8 h1 b% [5 ?0 C
IL-4在由单核细胞诱导成DC的过程中发挥的作用是抑制巨噬细胞的过度生长，从而引导单核细胞向DC方向分化。若培养体系中不加IL-4，单核细胞将分化为巨噬细胞。同时，IL-4还有降低细胞表面表达CD14分子的能力。CD14表达水平的降低是单核细胞分化为DC的重要标志。3 ?; q+ y. W. r( Z7 z% {' J
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GM-CSF和IL-4共同作用可使单核细胞定向分化为未成熟DC(immature DC)，此时的DC具有较强的抗原摄取和加工能力，但抗原递呈能力很弱。细胞表面中度表达MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)，但不表达CD14。
nTNF-a (肿瘤坏死因子-a)2 Y1 ?0 i( ]( C

TNF-a可下调未成熟DC的巨胞饮作用和表面Fc受体的表达，使细胞内MHC II类分子区室(class II compartment)消失，但能够上调细胞表面MHC I类、II类分子和B7家族分子(CD80, CD86等)的表达，使未成熟DC分化为成熟DC(mature DC)，此时DC的抗原摄取和加工能力明显减弱，而抗原递呈能力显著增强，可极强的激活T细胞。" I( Z3 _9 S+ O. {2 h2 L7 R! Q/ t
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CIK培养用细胞因子和抗体：' J; i4 \# l/ e. }* b" K3 O) u
nCD3激发型单抗：
T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。

由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。

此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。
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nIL-2 (白细胞介素-2)
IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。IL-2既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。
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nIFN-g (干扰素-g)7 S/ U5 H, @! A5 E
IFN-g 具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN- g ，可降低IL-2的用量。研究发现，IFN-g加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。先加入IFN- g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。

nIL-1a(白细胞介素-1a)
IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK 的细胞毒作用。

作者: wxdang 时间: 2014-4-9 13:01

同学习啊，谢谢

作者: 孙帅帅 时间: 2014-4-9 13:02

好像要用IL-4和TNF

作者: 细胞海洋 时间: 2014-4-9 14:21

细胞因子活化杀伤细胞因子（DC-CIK）实施流程# S: S/ h6 b a7 W, F" q5 T3 u
http://www.stemcell8.cn/thread-76393-1-1.html" o7 J& q* x0 x! e

作者: hwlightning 时间: 2014-4-9 16:33

回复 zhangjieyctc 的帖子" B- T+ [) T% u: W

是做科研还是临床治疗？

作者: 刘慧瑾 时间: 2014-4-9 16:58

白介素4

作者: zhangjieyctc 时间: 2014-4-10 08:57

回复 hwlightning 的帖子
6 L, p3 p8 d- R1 |% \8 |- i
请问有何区别，最好是临床上的

作者: zhangjieyctc 时间: 2014-4-10 13:41

回复 448998990 的帖子8 F4 M0 B- H& \) w t$ U

谢谢

作者: 草胞 时间: 2014-7-3 09:00

回复金华的帖子3 K! G7 b: ^/ O5 \
0 A6 J+ Q7 Y2 o; `2 D
克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗？这么说还有不激发的？这种CD3和临床上用于移植排斥的CD3应该不一样吧。有什么区别吗

作者: yanglixia 时间: 2014-7-4 17:10

回复细胞海洋的帖子# k! Z6 v; f0 Y4 I0 r: [! z

这是回输流程. V- u0 g3 n0 A1 Y( \& [
有没有细胞培养流程你

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