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标题: 求助-小鼠颗粒细胞体外培养 [打印本页]

作者: moluxingke 时间: 2014-5-26 11:43 标题: 求助-小鼠颗粒细胞体外培养

最近在做小鼠颗粒细胞的体外培养，查了一些方法：; r' D9 F, O+ P, ^
PMSG处理21-22天的小鼠，然后大约46-48h后取卵巢。% n( v/ P! V# Z' m# t
刺破卵巢中较大的卵泡，使COC释放出来，然后用移液器反复吹吸，使颗粒细胞和卵母细胞分离，移走卵母细胞，将颗粒细胞离心收集。
然后PBS洗涤一下，继续离心。
DMEM/F12培养基重悬，培养。4 a0 n# E% g6 T# a! @4 y9 `* X( j) ]! O
然后我想问一下：1 这种方法收集的大多是围绕卵母细胞的卵丘颗粒细胞，壁层颗粒细胞比较少，而且刺破卵泡过程中，有较多的颗粒细胞损失掉了，怎么才能收集较多的颗粒细胞，如果要铺一个12孔板的话，至少需要多少只小鼠？
2 因为小鼠已经经过PMSG处理了，也就是说颗粒细胞已经对PMSG产生应答一次了，那么在体外实验中如果我还打算用FSH处理这些颗粒细胞，颗粒细胞对FSH的响应会不会有一定程度的减弱？
3 原代分离培养过程中要不要加双抗？+ j) J) L* j, X' n! w! h' _

作者: dxb1985 时间: 2014-5-26 19:30

Murine granulosa cell morphology and function are regulated by a synthetic Arg–Gly–Asp matrix, K3 _- j5 I* ]5 v8 _3 {1 R! n
不知道这篇文章对你是否有帮助，用针多扎几次，颗粒细胞就出来了

作者: moluxingke 时间: 2014-5-27 10:17

回复 dxb1985 的帖子# r# v6 a8 k" M" O) _
N1 [. D9 |1 Y8 S; i
谢谢帮助，多扎几次得到的COC会多一些，我现在很想知道扎卵泡过程中散落到培养基中的那些颗粒细胞怎么收集，因为会混有很多细胞碎片，大的碎片可以通过过滤或是离心除去，但是小的就不好办，我再查查其他文献吧。

作者: luyue6453 时间: 2014-5-27 17:51

回复 moluxingke 的帖子5 d8 k8 Z+ s, s$ A& E
$ V' `! w# |! |2 T
不知道您要收集颗粒细胞有什么用，以前我养卵母细胞时，把卵子从卵巢中吸出来后体外培养，猪的是过22h成熟，将成熟的卵母细胞放到胰酶里，用自己做的针吹吸几次，卵丘细胞就掉下来了，这样可以避免有细胞碎片形成，这只是我的个人建议，你要的我没做过。

作者: moluxingke 时间: 2014-5-28 08:34

回复 luyue6453 的帖子

实验中用的条件性敲除小鼠，想做一些关于FSH或是LH诱导下颗粒细胞中的一些调控机制，所以打算用体外培养的方式来做做看，需要转病毒或是抑制剂处理，来对体内的结果进行一下验证。小鼠的COC可以直接用透明质酸酶消化，我现在就是想多收集一些颗粒细胞，毕竟敲除小鼠没有那么多，担心实验中不够用。

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