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标题:
康宁的2ml冻存管大家最多加多少毫升细胞液？
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作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 08:39
标题:
康宁的2ml冻存管大家最多加多少毫升细胞液？
同题目，又没有装的太多，复苏的时候开盖的，谢谢大神们
作者:
hefan1234
时间:
2014-5-27 09:25
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aochongyu
的帖子
2 B+ L) k& \2 L( k% g
( I' o' l( L& w7 a
康宁的2ml冻存管最多加1.8ml细胞液，但是一般加1ml或者1.5ml。
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 09:34
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hefan1234
的帖子
2 O! }/ {* |+ M# T
) N+ P* V: ~6 n% l
谢谢，你们拧盖子有没有遇到过在最后一圈要是力气大了就感觉到“咯噔”一下，好像拧过了，那到底需不需要拧这一圈啊？
作者:
月_幻影
时间:
2014-5-27 09:39
1.8ml左右即可，不要装满，拧盖的时候也不用太用力拧最后那圈的……
作者:
scottist
时间:
2014-5-27 10:36
康宁的冻存管我们以前用的质量总会出现问题，容易灌进一些液氮，复苏的时候还经常会炸开盖子，所以建议换成Nunc的感觉好一些。冻存液最好不要放太多0.5-1ml，多了也浪费，而且复苏时候不易融化。
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 11:34
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月_幻影
的帖子
" @+ q* o4 n! d- m0 u( m# D- H: {
; p& I$ s1 ~6 s9 S- S
恩，谢谢，你们要是1.8ml复苏37摄氏度最长几分钟？
作者:
月_幻影
时间:
2014-5-27 13:12
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aochongyu
的帖子
9 Q4 S L" Z0 L6 ?: |2 u% f; ~
: o5 w4 x! s9 Y8 |3 ]
37℃复苏的话最多不能超过1min，不然对细胞有伤害的。。。
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 13:31
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月_幻影
的帖子
" C. f7 T9 l7 T& V D4 j7 N8 y4 ~& N
3 R1 n H. u. K- g5 b
恩，好的，谢谢
作者:
伊诺强
时间:
2014-5-27 14:37
建议别超过1.5ml，1ml最佳，复苏的话建议使用42度，细胞不会受伤，速度还快！对细胞最好！
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 14:47
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伊诺强
的帖子
; I0 Z! {& \! R7 y7 s: X7 A9 s+ S
% E$ q- p% i+ u- l
谢谢，这个温度不同细胞还是不同的吧
; `: ]/ `: [. m8 m. T/ {
作者:
伊诺强
时间:
2014-5-27 14:52
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aochongyu
的帖子
# s1 @1 P; H4 f! ~
6 J ~' v0 g) U% V: c0 e
对的，但是一般都是人体来源的就没问题吧。
作者:
青云之上
时间:
2014-5-27 14:59
1 mL-----1.5 mL，不易太多，1.8有点多了，接一皿多，两皿少，复苏温度42---37，尽量快，所以冻太多复苏时间也会随之加长。另外，康宁的冻存管会进液氮，拿的时候切记要快，拿出来要解冻的管记得一定横着平放，不要竖着放或拿在手里~~~~
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 16:08
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青云之上
的帖子
O8 F; L7 U# ?8 i" i0 v
& `: X6 H a1 x/ b4 ]
谢谢，我想再问一下，是横着在水浴锅里复苏还是就横着放一会让液氮流出？
# Q7 C! C: u2 _) ]7 {1 o
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-27 16:08
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伊诺强
的帖子
6 X, g6 a% s$ a2 T g; X4 D$ n
6 R+ v" g6 W% N5 |; E! h
恩，是的
作者:
青云之上
时间:
2014-5-27 16:30
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aochongyu
的帖子
/ E6 l/ l0 a' S ?
" ~. a3 u2 U6 r
呵呵，在水浴锅里肯定是竖着了，进水不就污染了嘛，在从液氮罐拿出来到放进水浴锅这个过程平放，液氮基本也就挥发的差不多了~~~
作者:
细胞分裂
时间:
2014-5-27 17:17
拧盖子不要刻意拧的很近，如果灌进液氮，很容易炸开，另外见外建议楼主买Nunc的，虽然贵了点，但是内旋的，安全性会提高很多，细胞一般都遵循慢冻快融的过程，都是因为怕冻存液对细胞有伤害，加细胞液的话，一般都是1或者1.5，这样方便计算些，当然也考虑到安全性。
作者:
aochongyu
时间:
2014-5-28 09:46
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细胞分裂
的帖子
1 U) H0 q# P- ^; _, S
2 g2 l8 h5 {' P
恩，谢谢，是的
作者:
thor0504
时间:
2014-5-28 13:40
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月_幻影
的帖子
, J. ?# l# N0 A( Z6 ` H7 n. E
# }2 P d3 g8 l: z& t
1.8ml的冻存液在37℃水浴复苏的话1分钟一般不会全融的，请教下有什么诀窍吗？我们复苏时间没那么短。
作者:
牵着蜗牛去散步
时间:
2014-5-28 14:18
一般最多加入1.8ml，冻存管最好选择内旋，防止液氮进去，复苏一般选用37摄氏度复苏。
作者:
fdgg012345
时间:
2014-5-28 20:16
我一般用1-1.5买ml,内旋的（内旋的该盖子不易被冲掉吧），同一包corning的管子，里面总有几个管子盖子是坏的，用力拧会拧过头，这些管子我觉得还是不要用了吧。
作者:
月_幻影
时间:
2014-5-29 11:09
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thor0504
的帖子
3 G% ?( X. v4 _% A- O x
- k' d( C* D5 n' U8 g" w# M
1分钟内确实不会全融的，一般我们是先准备好盐水或者培养基在离心管中，然后37℃复苏时不等管内液体全融，融至半冰半水状态，只要方便从管中倒出即可，然后快速倒入准备好的盐水或培养基中（这时基本全融啦），然后离心去除冻存液。。。
作者:
thor0504
时间:
2014-5-30 11:12
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月_幻影
的帖子
% b, Q9 o! Q) K/ X+ b! b0 b- L! t
" j) z/ f8 d5 c {
这样啊，多谢老兄指点
但是还有一个问题半冰的状态对细胞没有影响吗？另外，你们这种复苏的方法的细胞收率大概能到多少啊？损失很小吗？
作者:
月_幻影
时间:
2014-5-30 13:29
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thor0504
的帖子
! E6 k/ \: I/ S1 Q
: q' j: Z$ Q* Y* ]" t5 b4 s- T0 z% D' f
这样复苏损失不大的，因为当它融至半冰半水状态不挂壁的时候其实也融化大半了，而且准备好的培养基也已暖至室温所以倒到离心管中的时候也就差不多全融了，还有、一管只有不到两毫升的液体好不好，能多难融？。。。
作者:
thor0504
时间:
2014-6-5 16:04
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月_幻影
的帖子
8 b5 z) `% k) r
}' b8 q& c1 `& f4 \) w3 b
谢了老兄，这两天忙试验，没来得及看论坛，抱歉回复的晚了，可能是我们复苏温度是40℃的原因，单支融至不挂壁的状态至少要1.5分钟，我回头把复苏温度再调高亮度试试，谢谢你的回复哦
作者:
月_幻影
时间:
2014-6-6 10:16
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thor0504
的帖子
6 G" U. e/ M3 Q5 W' J- u
& |' n5 ?$ I7 H" q- n! j- E
呵呵，没事，复苏的时候1.5min左右应该也没问题，个人建议复苏温度不要再调高了，兄台可以试试在复苏的时候在水浴锅里晃晃冻存管，这样可以加快融化，1min左右融至不挂壁应该没有问题。。。
作者:
tiramisu
时间:
2014-6-7 10:57
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thor0504
的帖子
9 n1 u, n0 s4 z0 b) V
) v' t6 j" D. t) l
我们一般都小于1min,37度水浴，边晃动冻存管，很快就化了。
作者:
suning5
时间:
2014-6-11 10:24
1ml就OK，复苏时放入37度，液体能流动即可，此时冻存管内温度为4°左右。加入PBS或生理盐水离心去掉DMSO时，要用4°冷水，减少温差，保证细胞最大活率。
作者:
s02260441
时间:
2014-6-11 10:40
本帖最后由 s02260441 于 2014-6-11 10:44 编辑
9 V7 n% I: K+ {4 o- |
4 A4 |- \' d; V I$ ?+ J2 c/ R, f' f
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aochongyu
的帖子
+ L- c+ K9 h L% B# u9 r6 D9 d
+ c) u% p0 j7 O6 N/ X/ ], M
不要多拧一圈，会让盖口的O-ring变型，反而会出现缝隙，液氮可能会渗进去。
X. I3 X' m- p: V2 {8 h$ v8 e9 n+ _
( g) Z4 P1 O/ o/ x& I7 I" t
细胞复苏37度下1分钟就够了，过久会伤害细胞，个人做法是搭配肉眼观察，解冻至几乎没有冰块的那一瞬间就接续至下一步操作，通常时间是1分~1分10秒左右。
作者:
gd541767393
时间:
2014-6-11 11:35
是外旋的那种吧，我们一般是1.5ml，复苏开盖的时候到是没出现什么异常，但是NUNC得那种内旋的容易出现
作者:
xunway
时间:
2014-6-12 12:13
2ml冻存管最多加1.8ml细胞液，一般加1ml或者1.5m
( W& j+ t3 p' M- x& X- @8 I% S
至于旋盖 稍微拧紧就行 不要太用力
6 K, \4 l, x2 G
37℃复苏 当然越快越好 一般 1min 能完全溶解的
5 r9 Q! H% }% y) a, y( [0 U7 }4 I
' N! Y# }* M" @
是否需要离心 看细胞吧
- F2 x/ n" F* F- S( X1 u H+ |
很多细胞还不能离心呢 离心反而不好待细胞贴壁后 换液 反而 还简单些
H& K$ t2 q% J! h: D% C
看细胞和个人操作习惯了
作者:
仰天
时间:
2014-6-12 12:39
原来刚做细胞冻存的时候都是1mL冻存，后来改成0.5mL了，这样细胞复苏的时间短，利于复苏后细胞的生长。
作者:
sycdegcb
时间:
2014-6-16 15:28
我们这冻存细胞一般每管加1ml冻存液,细胞数多时可加到1.5ml，很少加到2ml。如果冻存管装多了一冷冻，冰晶膨胀给把盖子鼓开，甚至把冻存管胀裂。
作者:
deshenglll
时间:
2014-10-17 10:54
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aochongyu
的帖子
! L+ k. Q0 b. x! R( h9 t$ m* e
: @& G; N' I) W0 `
最好只装小于1.5ml。你装的多开盖很正常。
作者:
小咪咪
时间:
2014-10-17 12:43
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aochongyu
的帖子
+ b F% C/ B. Y* z' Y5 Z* ?& H0 g
! p# P: X9 F5 V4 Y3 `9 k
我一般都会拧这一圈，因为以前试过很多没有拧紧的情况，复苏经常出现各种的问题，后来我就习惯性地拧紧了。冻了很多细胞也复苏了很多的细胞，状态都可以，所以个人建议拧~
作者:
生命之轻
时间:
2014-10-18 16:30
最多1mL吧 加多了不好
作者:
20084720113
时间:
2014-10-18 18:03
经常装2ml的，我说为什么有时候开盖，感觉盖子松了
作者:
20084720113
时间:
2014-10-18 18:03
经常装2ml的，我说为什么有时候开盖，感觉盖子松了
作者:
yeshch
时间:
2014-10-19 10:22
我们都不超过1.5ml，如果太多融化时太慢细胞受损严重；一般37、38度，1min之内融完（注意不要等全部融化在从水浴锅中取出，一般待融化剩一小冰块时即可取出，准备加入medium）
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但是还有一个问题半冰的状态对细胞没有影响吗？另外，你们这种复苏的方法的细胞收率大概能到多少啊？损失很小吗？