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标题: 新手上路，6周龄大鼠MSC P1 第5天 [打印本页]

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-5-28 22:58 标题: 新手上路，6周龄大鼠MSC P1 第5天

望各大神点评，已安排好下周一用3周龄重新取材[attach]61723[/attach][attach]61723[/attach][attach]61723[/attach]

作者: yiyi8909 时间: 2014-5-29 08:07

三周可能有点小，要用成年大鼠，p1是传过一次吗？要是传过一次可能传代密度太小。要是原代的话应该是贴壁的少，中间操作有问题

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-5-29 08:55

回复 yiyi8909 的帖子5 j4 k, Y5 g& P# ]' j7 w* @6 q
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传过一次是的细胞太少了之前消化的时候很多都没消下来前辈你们一般用几周的大鼠取材？

作者: 素心无痕 时间: 2014-5-29 09:15

动物年龄稍微小一些MSC的活性好一些。我们这边一般用4周左右的大鼠，另外，如楼上所述，传代接种密度太小了，不利于细胞生长，根据不同的培养耗材接种不同密度的细胞，这在人卫版《组织和细胞培养技术》中有介绍。消化细胞可以考虑使用sigma公司的trypsin（含0.25%EDTA）。

作者: 青云之上 时间: 2014-5-29 09:42

密度太小了，应该是操作有问题，原代就很少？过细胞筛吗？~~~

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-5-29 10:27

回复青云之上的帖子0 b1 E1 ~9 \7 Q/ ~' [1 X) V! U
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没有过细胞筛

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-5-29 10:28

回复青云之上的帖子
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前辈细胞密度的把握很重要你们做原代的时候就会计数吗

作者: yiyi8909 时间: 2014-5-29 10:46

回复倒腾细胞的帖子

消化一般加过胰酶20-30s后倒掉，剩余的消化一分钟到两分钟已经足够了，细胞都可以被消化下来，再吹打几次基本都成单个了。你用的培养基是哪种？我们一般用5周左右大鼠

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-5-29 13:12

回复 yiyi8909 的帖子1 F* L( Q- B: n' B+ G1 f" b! R

Gibico低糖DMEM培养基、Gibico FBS 10%，双抗1%
我怎么觉得我们从取材到培养到换液到消化都有问题

作者: 青云之上 时间: 2014-5-29 16:43

回复倒腾细胞的帖子- w. [0 H( w& Z8 y5 }/ r
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原代一般是不计数的，原代时候细胞比较杂也会比较多，培养几天，一传代，因为培养基的关系，细胞就会比较纯了~~~

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