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标题: 求助：关于BMC复苏再培养的问题 [打印本页]

作者: 听不到 时间: 2014-6-3 15:29 标题: 求助：关于BMC复苏再培养的问题

我提取的大鼠的骨髓间充质，传代培养的都挺快的，但是一旦冻存了，再复苏培养的话就会长得特别慢，而且看上去也不是长梭形而是有点伸展开了，想知道有同学出现这种情况的吗？怎么解决的啊？我冻存的条件是DMEM：血清：DMSO=6:3:1,因为舍不得用血清...

作者: zhrt 时间: 2014-6-3 16:05

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你试试4:5:1，还有与冻存密度有关

作者: 听不到 时间: 2014-6-3 16:17

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但是我之前用过血清：DMSO=9:1，复苏后也是这样的，冻存密度大概是一个100ml瓶长满后冻两管，一管1ml冻存液

作者: zhrt 时间: 2014-6-3 16:55

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你没计数吗？冻存密度要低点

作者: 听不到 时间: 2014-6-3 17:06

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没计，因为之前冻肿瘤细胞大概就是这样冻，所以就没计数...不过冻存密度会对细胞有这么大影响吗？感觉都没有干性了...我对F4代细胞提了RNA做了RT-PCR，以OCT-4为引物，完全没条带，对照的beta-actin条带就特别亮，愁死了

作者: zhrt 时间: 2014-6-3 17:10

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复苏后接种密度多大，活细胞数怎样？

作者: 听不到 时间: 2014-6-3 17:18

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复苏是一管种到一个100ml瓶的，因为我觉得他特别难贴壁，就隔天才看，看的时候已经贴壁了大概50%，还挺好的，但就是细胞形态不对

作者: zhrt 时间: 2014-6-4 08:43

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冻存的第几代？会不会有老化现象

作者: 听不到 时间: 2014-6-4 09:49

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冻的第3代，按说是不能这么快就老化的

作者: zhrt 时间: 2014-6-4 10:23

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你在找找看看是不是胎牛之类有啥改变。不过我还是怀疑是不是冻存条件的问题，像密度过高，冻存液的比例，时间的把握，液氮的覆盖率等

作者: 听不到 时间: 2014-6-4 16:29

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那就是说你冻存BMC的时候没出现这种问题吧？复苏后细胞还是呈梭形的而且长势良好？有没有可能是我提取的不是干细胞啊？我消化的时候经常很难消化的，总是等挺久的才能把细胞都消化下来，不过我都不舍不得扔

作者: zhrt 时间: 2014-6-5 09:45

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我们冻存第四代和第五代，一般2-3天传一代。消化时胰酶放37度预热，可以轻轻拍打瓶底

作者: zhrt 时间: 2014-6-5 09:48

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奥，我做的是脐带源MSC,应该都差不多

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