干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 脐带酒精灭菌多久？ [打印本页]

作者: Yorkshining 时间: 2014-6-19 09:07 标题: 脐带酒精灭菌多久？

想从脐带wharton’s jelly中分离MSCs，由于是别人取的，担心会染菌；我们拿回来的脐带需不需要用酒精浸泡灭菌啊，浸泡多久不会影响细胞的活性啊？

作者: yaolinzhang 时间: 2014-6-19 09:38

回复 Yorkshining 的帖子, l, L- s* ^6 J5 S4 a4 `# {
0 i! \+ v: l7 X; K
用加有双抗的PBS冲洗干净，分离完细胞培养时加双抗就可以了

作者: 青云之上 时间: 2014-6-19 09:39

用酒精吗？我们取的组织在分离的时候都是在PBS中加双抗反复漂洗后再做处理，酒精对组织本身也会有影响吧~~~~

作者: deshenglll 时间: 2014-6-19 10:36

回复 Yorkshining 的帖子
2 T4 C; X5 g6 }$ s$ b% @6 p
用酒精消毒个2-3分钟就行了。你可以试试。没必要用双抗。

作者: 彩云子 时间: 2014-6-19 10:40

加抗生素是最方便的方法。若是用酒精消毒，浸泡时间不超过1min,用PBS及时冲洗掉酒精，还担心污染的话用PBS冲洗剥下来的胶体后种瓶。

作者: FreeCell 时间: 2014-6-19 13:16

嘻嘻，短时间酒精浸泡基本没有任何杀菌作用，微生物酒精消毒一般需要过夜

作者: 月_幻影 时间: 2014-6-19 13:34

不用酒精浸泡吧，用加双抗的PBS清洗下就可以，再说酒精浸泡的杀菌效果并不好。。。PS.以前做组培的时候消毒都是先用酒精清洗，再用升汞消毒的，直接用酒精的基本99%的都污染啦……

作者: 元芳 时间: 2014-6-19 14:04

FreeCell 发表于 2014-6-19 13:16
. j- V8 y9 Y- ?& N1 F嘻嘻，短时间酒精浸泡基本没有任何杀菌作用，微生物酒精消毒一般需要过夜

那打针前用酒精棉球擦拭是为了————降温？

作者: FreeCell 时间: 2014-6-19 14:48

本帖最后由 FreeCell 于 2014-6-19 14:49 编辑

回复元芳的帖子# u2 `2 d, L) @5 e% r" b. K* z
5 p, K( t& O8 g/ E) x. u' ]
仅仅是用无菌棉球擦除细菌，清洗作用，无菌水一样的效果

作者: zhrt 时间: 2014-6-19 15:01

回复 Yorkshining 的帖子
2 d5 _7 T, `* w# i
用酒精棉球擦一遍，用PBS或者生理盐水冲洗即可

作者: 元芳 时间: 2014-6-19 17:37

FreeCell 发表于 2014-6-19 14:48
D. D7 m) E2 |# V: Y8 e回复元芳的帖子
- g' I& p) L1 l2 ]+ U
' ?4 c3 o" G* W% l. B仅仅是用无菌棉球擦除细菌，清洗作用，无菌水一样的效果

' f0 B( X) }- Y; C6 c* g$ c* m1 ~
医用酒精地位从此不复存在啊

作者: luyue6453 时间: 2014-6-20 09:34

回复 Yorkshining 的帖子
Z7 s! A! V; ]8 j+ {5 h$ O! i3 Q8 `( N
用要超过1分钟，

作者: jxydiandian 时间: 2014-6-20 09:39

可以酒精泡3min左右，不能超过3min, 羊膜层开始开始变皱，然后PBS洗涤，注意分离的时候将脐带两头弃掉不用.

作者: 孙帅帅 时间: 2014-6-20 10:21

最好不要用酒精，对细胞会有损坏的！用加有双抗的生理盐水多清洗几遍就ok了，注意两头要特殊处理！在细胞培养液中培养基推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。

作者: Yorkshining 时间: 2014-6-20 10:52

回复孙帅帅的帖子2 M2 s m2 p. W4 W- x

谢谢，两头该如何特殊处理呢？还有，我是先剥胶、在抽血管，还是反过来操作方便一下。？抽血管是直接就抽出来，还是要把脐带剖开，用剪刀分离出来呢？

作者: 孙帅帅 时间: 2014-6-20 11:04

回复 Yorkshining 的帖子& w5 j5 j3 L6 l8 ^: S6 N# ?

直接抽血管是抽不出来的！需要先拨开脐带，再把细胞分离出来。需要注意的是，两根动脉血管壁较厚，比较容易去除，但是静脉壁较薄，并且分离的时候很容易就撕断，需要有耐心！两头可以剪去1厘米左右的脐带！然后用加有双抗的生理盐水清洗几遍！需要注意的是，在清洗过程中最好把血管里的血挤出来，多洗几遍！

作者: wanglimaomao 时间: 2014-6-20 11:21

酒精浸泡细胞就都死的差不多了，而且酒精消毒至少要30分钟，而且还不能杀灭真菌，孢子等。所以如果你的组织在一开始就已经有污染了，加多少抗生素都没有用的。所以，你就先试试养吧，以后只能在实验开始取材的时候小心才可以。

作者: cjsbaicai 时间: 2014-6-20 16:26

为了防止诱导分化，建议不用抗生素处理，酒精处理2-3分钟就可以了

作者: 洛古16 时间: 2014-6-23 10:08

我们是用生理盐水清洗5-6遍，不放心的话，可以添加双抗

作者: 沙漠狐o0 时间: 2014-6-23 10:30

不用酒精的，只需要在原代培养时加入1%双抗或者三抗就可以。如果非要用酒精，浸泡1min即可。

作者: 花饶然 时间: 2014-6-23 10:59

本人的观点和以上几位的不太相同，本人到是人为抗生素的抑菌作用是必须要经过一段时间才能表现出来。最好是过夜处理。而酒精是快速消毒的，我以前做组培也有一段时间，酒精的确是要配合升汞，但是不用酒精也不可靠貌似。

作者: Yorkshining 时间: 2014-6-23 15:01

回复孙帅帅的帖子" Y% M3 b1 x' v5 y$ K

谢谢，那是先去除羊膜再去血管，还是反过来方便一些？

作者: Yorkshining 时间: 2014-6-23 15:12

回复孙帅帅的帖子2 E; J* X. P' R/ [1 r! B

还有你组织块培养初期是否倒扣，倒扣多久，培养基成分是什么呀？问题有点多，谢了啊

作者: 听不到 时间: 2014-6-25 10:22

取回的时候要放在冰中保存，尽量早做，做的时候在含2%双抗的PBS里多洗几遍就行了，培养液里也要加双抗的，一般不会染菌的

作者: gd541767393 时间: 2014-6-26 08:53

我们一般冲洗两次，浸泡差不多1分钟，然后用加有双抗的PBS缓冲液浸泡20分钟

作者: CELL007 时间: 2014-6-27 10:27

我们是这样操作的：) ? g0 X) m4 T" [
第一，拿到样品后，看看是否有破损，如果有破损就把破损处剪掉，也包括脐带剪下的断面，都要去掉，剪得时候，剪刀的剪口放在非破损处；待破损处都去除干净了，然后用含有PS的PBS多次冲洗；
第二，讲长的脐带剪成合适自己处理的小段，再洗，去除掉残血；
第三，去掉三根血管和外面的膜，剪碎铺于瓶中。
消毒可以用酒精，他们有这样操作的，据说只是为了好去外膜，后面还是要用PS洗的。

作者: hefan1234 时间: 2014-6-29 07:57

回复 Yorkshining 的帖子$ n6 G1 s T9 Z2 _; I- W+ B

一般用加双抗的PBS反复洗三次，剥胶后再洗两次种瓶；一般不用酒精，非要用的话，75%酒精洗不超过一分钟，因为酒精对组织伤害还是挺大的

作者: 杨知涵 时间: 2014-7-2 11:42

用生理盐水把血清理干净就可以，多冲洗几遍

作者: wuzhongqi 时间: 2014-7-2 17:15

用碘伏消毒几分钟，然后用生理盐水多冲洗几遍。

作者: zhangjieyctc 时间: 2014-7-4 10:09

回复 Yorkshining 的帖子9 ]& V4 t1 h; l: C
0 H7 o7 f. A4 z2 q
通常用酒精浸泡2分钟，还有酒精浸泡短时间对组织没有影响的，浸泡时酒精能够跟脐带表面的羊膜形成一层保护膜，所以对组织没有任何影响

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)