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标题: iPS克隆数目如何统计 [打印本页]

作者: LuXK 时间: 2014-6-20 08:53 标题: iPS克隆数目如何统计

各位大侠，在iPS实验中有时要说明iPS形成的效率，一个指标就是克隆的数目，请问这个是怎么统计的呢？谢谢！

作者: mecol 时间: 2014-6-20 09:00

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你好，我也准备做这个，有不懂的向你请教，可以吗？

作者: 碧螺春的秋天 时间: 2014-6-20 09:14

在荧光显微镜下直接计数，数重复孔的克隆数然后取平均值

作者: LuXK 时间: 2014-6-20 09:24

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我也是刚做，也有很多不明白的地方，可以相互交流一下。

作者: LuXK 时间: 2014-6-20 09:25

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我用6孔板做的，整个孔的克隆数都要计吗？在显微镜下数也不好数吧？

作者: heirrii 时间: 2014-6-20 10:00

显微镜下数数，在培养皿下面垫上自制的透明的格子纸，可以方便计数，避免重复计数。

作者: ciweiyuan 时间: 2014-6-20 10:24

种植等量的细胞，把培养皿划分为不同的格子，做好标记，在显微镜下计数克隆数目

作者: wanglimaomao 时间: 2014-6-20 11:23

一般多少选取相同大小的视野，然后随机计数克隆个数，多数几个复孔就OK啦。

作者: 碧螺春的秋天 时间: 2014-6-21 12:04

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我们一般用12孔板，每个有三个重复，整个孔的都要数，然后计平均值。显微镜调到合适的倍数，然后移动的时候注意距离，不要漏数或多数，刚开始可能不好掌握移动，也可以通过划线来帮助计数

作者: LuXK 时间: 2014-6-23 10:28

大家数克隆是用AP染色吗？还是看荧光？

作者: shihuijunm 时间: 2014-6-23 12:43

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可以拿手机或相机拍照，然后用PS里的分析工具，里面可以计数，你可以把图片放大，计数一个上面都会有一个数字标记，很方便，而且不容易漏数，可以试试哦

作者: LuXK 时间: 2014-6-30 08:32

回复 shihuijunm 的帖子9 c+ h) u- P% h% w2 n, e e
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谢谢。请问你们一般是用AP染色之后计数还是看荧光？每个12孔板大概的克隆数是多少？

作者: LuXK 时间: 2014-6-30 08:33

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你好，请问你们一般是用AP染色之后计数还是看荧光？每个12孔板大概的克隆数是多少？

作者: nichifanlema2 时间: 2014-6-30 08:42

回复 LuXK 的帖子7 s# \+ X5 F1 t1 h4 e3 B) G: ^" U8 W
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如果细胞不再使用的话，可以用AP染色后计数，清晰明了。如果细胞要留着，那只能在显微镜下数数了。

作者: shihuijunm 时间: 2014-6-30 10:26

回复 LuXK 的帖子1 B( z6 f8 A5 Y' n
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我做羊的跟人鼠的可能不太一样我是直接计数AP阳性的，一般用六孔板，条件不同，获得的AP阳性也不太一样，最多一孔有一千多个

作者: binglovekun 时间: 2014-7-3 15:25

可以用数造血干细胞克隆的那种带格子的皿数，不容易漏数

作者: binglovekun 时间: 2014-7-3 15:26

可以用数造血干细胞克隆的那种带格子的皿数，不容易漏数

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