干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 请问一下,我做的是诱导成骨的实验,但是用茜素红染色常常不是鲜红色 [打印本页]

作者: liluoshushu    时间: 2014-7-5 18:11     标题: 请问一下,我做的是诱导成骨的实验,但是用茜素红染色常常不是鲜红色

您好,请问一下,我做的是诱导成骨的实验,但是用茜素红染色常常不是鲜红色,是有点偏紫红色,用的茜素红染色液是同一瓶,这是什么原因呢?另外,有没有人做了成骨细胞的IF,染成什么样子呢?. d& T1 D5 E$ r: w+ I$ R; P  T( v

作者: lipd09@mails    时间: 2014-7-7 10:45

您好,您的茜素红染液最好调到PH4.2,染色的步骤如下:细胞--10%福尔马林固定 常温30 min--染色 常温20min--双蒸水漂洗2-3次。可以试试我们染色效果挺好的,满红的。
# O  h$ o+ V" A! Q7 _1 v  x
作者: luyue6453    时间: 2014-7-7 17:48

回复 liluoshushu 的帖子
6 Z7 |" t# ]( ^& ~" h$ B+ x# Y& S5 E% m& U" b$ f6 Z2 u% A
我也是和你一样的,结果,特别不好看
作者: liluoshushu    时间: 2014-7-8 09:11

回复 luyue6453 的帖子
9 c$ J# _2 C. h% c+ b- D  h1 K: C. I/ }3 W6 R( @9 U3 I5 @* m1 L
我做预实验的时候结果特别好,鲜红鲜红的,很明显,但是正式实验就是呈深紫红,不好看,每次实验都要半个月,一直找不到原因,挺郁闷的
作者: 加拿大STEMCELL    时间: 2014-7-8 16:18

本帖最后由 加拿大STEMCELL 于 2014-7-8 16:21 编辑 6 X, C) j5 a2 F+ s

1 U" ]' ]0 l7 l- w( R回复 liluoshushu 的帖子
5 N. r$ {" @  H/ h- \
% A4 m/ r9 b+ D7 T: s您好!关于您的问题,我们咨询了总部的技术支持。其实我们自己在做茜素红染色的时候,也会有轻微的颜色差异。比如附件文件中的图7C和图10B,颜色也不是完全一样。但只要有阴性对照,实验结果应该还是OK的。: C3 `  l7 ]: Y: i  R9 k8 v( U

/ W+ m) |) E6 M# P5 ][attach]62633[/attach]
+ ?* O, j  v" P4 n! o: ^0 R1 I4 @" T- `+ X
此外您也可以参考下我们自己的茜素红染色操作步骤。谢谢!
* r# `( ^4 p7 p' L  e' s
9 a( o* u. F1 Q2 Q- S( m2 l( ^) cAlizarin Red S Staining Protocol:* ?3 h: p; M' k4 v; R; F
* Y5 e! ?: ~, ]1 R' k' ]6 y& y( Q
Alizarin Red S (Sigma A5533-25g)9 t0 j. p; s1 c- r: F! V9 E
FW = 342.3g/mol' Y' g, H' S" B9 I) q$ x: k

2 Q# @( N! u% K* nPrepare 40mM Alizarin Red S Staining Solution (100mL):
( |0 d) F& f% U) ?3 t5 \4 { ) [  V& B- I, W6 b1 `; Q8 y
1. Dissolve 1.3692 g Alizarin Red S in 80mL of dH2O; V3 Z: y/ r( K8 }
2. pH Alizarin Red S solution to 4.1 with 10% (v/v) ammonium hydroxide+ x  M1 Q2 d5 V& D# X
3. Top up volume to 100mL using dH2O
2 ]: _3 u% H. X& T5 S; }: Z7 S
3 D9 O0 m3 R. a+ X' L; LStaining Protocol: (6 well plate)3 O( f- S6 }- }: m

0 _$ c  v7 r( Q: e" k" r% z9 L5 \- A" q1. Wash each well with 1xPBS
" d7 x- c) w9 T7 P2. Fix cells using 10% formaldehyde at room temperature for 10min
! V" i: j. Z5 l& L3. Wash cells two times with dH2O8 e5 ?/ t& a2 \* m8 d$ ]7 N+ R  J
4. Add 1mL of 40mM Alizarin Red S Staining Solution into each well and stain at room temperature for 20mins on a shaker
! m% ^2 Z3 G, D5. Aspirate off excess stain and wash four times with 4ml of dH2O for 5mins each time on a shaker
作者: liluoshushu    时间: 2014-8-20 12:54

回复 加拿大STEMCELL 的帖子6 ]2 w' U+ A& f; H/ p. }
1 U* c4 l0 L" r
谢谢
作者: kelvinlin    时间: 2018-1-29 11:29

提示: 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽




欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/) Powered by Discuz! X1.5