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标题: 请问一下,我做的是诱导成骨的实验,但是用茜素红染色常常不是鲜红色 [打印本页]

作者: liluoshushu    时间: 2014-7-5 18:11     标题: 请问一下,我做的是诱导成骨的实验,但是用茜素红染色常常不是鲜红色

您好,请问一下,我做的是诱导成骨的实验,但是用茜素红染色常常不是鲜红色,是有点偏紫红色,用的茜素红染色液是同一瓶,这是什么原因呢?另外,有没有人做了成骨细胞的IF,染成什么样子呢?* s% h  k& I6 ]$ _

作者: lipd09@mails    时间: 2014-7-7 10:45

您好,您的茜素红染液最好调到PH4.2,染色的步骤如下:细胞--10%福尔马林固定 常温30 min--染色 常温20min--双蒸水漂洗2-3次。可以试试我们染色效果挺好的,满红的。& N+ O+ {) ~1 r9 F& z& i

作者: luyue6453    时间: 2014-7-7 17:48

回复 liluoshushu 的帖子5 J. r; [3 W2 @9 x4 p

, t- B* d# v7 b" P1 @7 B我也是和你一样的,结果,特别不好看
作者: liluoshushu    时间: 2014-7-8 09:11

回复 luyue6453 的帖子: ~0 M+ H) _, ?: F
/ ^1 }: m8 U, _
我做预实验的时候结果特别好,鲜红鲜红的,很明显,但是正式实验就是呈深紫红,不好看,每次实验都要半个月,一直找不到原因,挺郁闷的
作者: 加拿大STEMCELL    时间: 2014-7-8 16:18

本帖最后由 加拿大STEMCELL 于 2014-7-8 16:21 编辑 - j6 j9 J1 v  Z* t1 T

+ R1 R. M* i8 q回复 liluoshushu 的帖子$ _4 y% v# R/ J3 Q( m

) \6 A; \' [. ?2 O* I' `您好!关于您的问题,我们咨询了总部的技术支持。其实我们自己在做茜素红染色的时候,也会有轻微的颜色差异。比如附件文件中的图7C和图10B,颜色也不是完全一样。但只要有阴性对照,实验结果应该还是OK的。
3 c  ~# m% s/ y" T" N# @
2 @1 K8 H/ x; g[attach]62633[/attach]3 z; b3 m3 G7 k8 W

! x2 T0 m. I, f2 ~2 Y& N6 j: c2 s此外您也可以参考下我们自己的茜素红染色操作步骤。谢谢!
8 D4 j7 ^5 X0 G) x( c6 M( W5 F
$ y- G, C, Y/ e' j+ E% {. XAlizarin Red S Staining Protocol:' e: r9 i* Y: o! y' M" a" ^
  A* p8 a3 }) s
Alizarin Red S (Sigma A5533-25g)
' i+ p: B- M8 M) wFW = 342.3g/mol2 Q  @% w% C2 w( S5 K# M" f
0 _, c6 n/ H4 f& x
Prepare 40mM Alizarin Red S Staining Solution (100mL):/ z( ?4 K0 @& ~. P
2 B4 H! m$ r0 F: l  {& I  {% D
1. Dissolve 1.3692 g Alizarin Red S in 80mL of dH2O
; F' d- C& m6 m! w# w8 }9 t2. pH Alizarin Red S solution to 4.1 with 10% (v/v) ammonium hydroxide# {7 e5 x+ B9 b# P2 N% R: B4 _
3. Top up volume to 100mL using dH2O1 o+ C, i0 T9 Y

! O2 f; ^. d# U- i( }0 t" J. ], }Staining Protocol: (6 well plate)& I8 i) j9 V& I. Y. {6 _: c9 g

- n# P- z% M0 L1 _% J; J2 V  u' o* D1. Wash each well with 1xPBS& Q: @& C4 D8 n& C( m  Z; u' F
2. Fix cells using 10% formaldehyde at room temperature for 10min3 r% }5 t3 W' `  n6 o0 H3 u1 P
3. Wash cells two times with dH2O
+ I, \" w  o, f. t4. Add 1mL of 40mM Alizarin Red S Staining Solution into each well and stain at room temperature for 20mins on a shaker6 c5 x; [. d  ^$ Y: O6 S4 b1 H' f
5. Aspirate off excess stain and wash four times with 4ml of dH2O for 5mins each time on a shaker
作者: liluoshushu    时间: 2014-8-20 12:54

回复 加拿大STEMCELL 的帖子
- N; X6 t% b( x6 i. s8 X# P1 T% ~) I+ X  ?  n
谢谢
作者: kelvinlin    时间: 2018-1-29 11:29

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