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标题: 精原干细胞建系交流--发现培养液变黄，细胞逐渐死亡 [打印本页]

作者: 20111109 时间: 2014-8-13 12:41 标题: 精原干细胞建系交流--发现培养液变黄，细胞逐渐死亡

问：各位大侠们，最近遇到问题，我现在做小鼠精原干细胞体外建系，发现到F3代培养液变黄，细胞不见生长，再传代的细胞状态很差，贴壁性不好，逐渐就像枯掉一样，换液就几乎没有sscL .
D& e3 P# r$ C- X( z( F0 [
请问这里有好心的亲们能帮我分析一下原因么，万分感谢呢。

作者: w343989328 时间: 2014-8-13 13:03

feeder状态呢？支原体？

作者: 20111109 时间: 2014-8-13 16:47

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* Z, }/ z7 t) A( l6 |& @- ~1 J
feeder挺好的我也怀疑过是支原体

作者: 20111109 时间: 2014-8-13 17:22

回复 w343989328 的帖子$ m" T* @& s3 ~8 q _5 Z. d

如果支原体污染我该怎么办呢或者怎样预防比较好万分感谢

作者: w343989328 时间: 2014-8-13 17:38

很难避免的，我们也只能这样做：SPF级拿出后迅速开始实验，不要在外面晾太久；杀死小鼠后，酒精浸泡数次；解剖小鼠的时候，手术器械分开用，碰到皮毛的就不要碰内脏；建系后，取上清检测支原体，当然feeder也要事先检测；如果污染，有一些药物可以杀的，但效果似乎不是特别好。你如果只传到P3，我的建议是重新分离。

作者: 20111109 时间: 2014-8-13 21:30

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# D1 C, d' m# M% @ M" R
我不理解你的意思是支原体来源于小鼠可是我的细胞从建系到F3代时间有20多天了这段时间支原体是一直在潜伏状态么？

作者: w343989328 时间: 2014-8-14 14:43

支原体主要两个来源，一个是血清，一个是动物本身，即使是SPF级也很难避免。我们之前分离耳朵的纤维细胞一直出现支原体，SSCs还好，所以我猜，你可能在分离细胞过程中被支原体污染了。支原体一般不会直接导致细胞死亡，只是和细胞争夺养分，导致细胞状态逐渐变差，是一个比较慢性的过程。而且，细胞培养基迅速变黄，是支原体污染一个特征。

作者: 20111109 时间: 2014-8-14 19:29

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我的细胞最先出现的是不分裂，细胞散在存在，几天以后有部分细胞会飘起来，在培养空的中间液体中悬浮着很多细小的细胞，换液之后，细胞就越来越少，最后细胞就像崩解了一样，我也不清楚是不是支原体，培养液是会变黄的。

作者: w343989328 时间: 2014-8-15 00:11

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# T/ ^$ P( b; x; U
嗯做个支原体检测吧就个PCR而已

作者: saifast00 时间: 2014-8-15 12:24

回复 w343989328 的帖子' Y9 G* i) m+ E V

支原体感染培养基是不会有明显改变的吧？？

作者: w343989328 时间: 2014-8-15 20:17

回复 saifast00 的帖子' _9 d* ~) e, b4 R5 d% q, G
3 w/ g! j0 R4 n
会变黄变得很快啊，因为营养被抢夺啊

作者: 20111109 时间: 2014-8-22 08:45

回复 saifast00 的帖子2 w7 {& G$ r D* n

是么？那请问培养液隔夜变黄有哪些原因呢？我都快崩溃了，找不到原因，细胞就一直死下去了。

作者: saifast00 时间: 2014-8-22 09:22

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& A9 V, s$ |. }1 z* y
细菌真菌污染都会变浑浊变黄，还有变黄主要是因为培养基PH变酸，看看你的孵育箱CO2是不是偏高？

作者: 奋斗的时光 时间: 2014-8-29 17:52

有没有可能是分化了，或者培养基中的某些养分刺激了精原干细胞的凋亡？
精原干细胞的培养基成分是个很重要的因素。, z9 `- Y" W+ C) t
但是如果照你所说，贴壁都不怎么好，吸出来都不剩啥了的话，这个细胞状态就太差了。1 r( u7 B4 w9 a& U$ C, O- A
也建议重新分离把。

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