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标题: 求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！ [打印本页]

作者: 2013sp 时间: 2014-8-26 22:17 标题: 求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！

求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！

作者: 洛古16 时间: 2014-8-27 09:06

组织：0.2%一型胶原酶=2：1 % z* A0 o) ?% M5 X2 n6 {
37℃消化半小时
加PBS稀释终止反应，; k w: e8 [" f4 O2 E
离心，* T; p7 z; x, D# c' X) Y9 m
培养基重悬

作者: luoye1986 时间: 2014-8-28 10:29

0.1%的胶原酶也可

作者: 水念人倦 时间: 2014-9-10 09:17

本帖最后由细胞海洋于 2014-9-10 11:52 编辑 ; L' I" t, [2 M, k. J, S! D, X
8 J9 P1 ^/ V! U' x
见文章第二页Reaserch Design and Methods部分，比较详细。
[attach]63963[/attach]

作者: chenchunlei 时间: 2014-12-23 13:30

回复 2013sp 的帖子
2 S5 \% t' b3 _3 f
步骤如下：7 T7 |5 x0 G! U9 r
1、将脐带机械性剪碎
2、加入胰酶37℃消化30min左右0 g v; Z, H8 T' E1 C. \9 |' H
3、PBS洗两遍5 r7 H6 {, ]6 Z( k9 k
4、机械性吹打2 s$ d+ n" m1 S$ y# \& i: W1 R
5、100目细胞筛过筛8 n- |: `8 D, g% O( T" u1 o& c3 v
6、收集细胞悬液离心) S9 Y3 g& s& E5 d8 s% H1 j/ u
7、弃上清，培养液重悬细胞接种到培养皿中

作者: scarletkiki 时间: 2015-2-6 13:03

为什么我用胰酶消化后，细胞悬液有点粘稠，镜下可以看到发亮的圆形细胞？

作者: baby00000003 时间: 2015-2-6 13:43

精细一点的话，可以先通过手术方法剥掉血管和羊膜
酶消化的时候加入透明质酸酶和分散酶比单用胶原酶更好~& ]- ?/ h# p4 o
罗氏好像有专门干这个用的混合酶，不图便宜的话，可以试试~

作者: 细胞海洋 时间: 2015-2-9 11:28

回复 scarletkiki 的帖子1 J1 z7 I3 ]% {9 r6 d
+ \$ ?8 k& i3 N1 p5 L
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作者: lyj-0017 时间: 2017-4-16 15:07

回复洛古16 的帖子* y0 o: f1 u3 m8 g( p) W9 e' _
# m% M3 [- y/ c/ o2 |3 U6 T
为什么是组织多，消化酶量少？不是应该消化酶的量应该多于目标组织吗？

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