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标题: 冻存液能长期保存吗 [打印本页]

作者: 什么颜色的番茄 时间: 2014-8-28 16:42 标题: 冻存液能长期保存吗

实验室新手，今天配了50ml的冻存液，DMEM：FBS：DMSO=7：2：1，请问能不能在-20°C长久保存呀？？？？好伤心呀

作者: miltenyi 时间: 2014-8-28 17:53

最好是梯度降温，最后在液氮中保存。如果有梯度降温盒，可以将冻存样本放在冻存盒中，再放在-80冰箱，如果没有梯度降温盒，那就在4度冰箱和负20度冰箱依次放置2小时后再转到负80度，负80度过夜后再转到液氮罐，在液氮中可以长期保存的。一般不建议在-20°C保存，至少也是-80°C保存。
另外，冻存液的比例不同实验室也会不一样，营养成分不同，细胞活力和保存期限也不一样吧，有的甚至直接用FBS：DMSO=9：1。

作者: heirrii 时间: 2014-8-28 20:11

你是说冻存液配多了，一次用不完吗？我们一般保持在4度冰箱，一周内用于冻存细胞

作者: leizhao1229 时间: 2014-8-29 10:58

一两周内能用完的话可以保存在-20度，时间再长点就-80度了，如果更长的时间最好放液氮保存，不过需要梯度降温。

作者: hefan1234 时间: 2014-8-29 12:58

回复什么颜色的番茄的帖子
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最好不要放很久，我们实验室配置好的冻存液一般在4度冰箱放一周，超过一周就不要了，个人觉得配好的冻存液反复冻融不好。其实如果不怕麻烦，现配最好了，不过使用前必须预冷处理。
冻存细胞时，加冻存液混匀装冻存管后放入4度预冷的程序降温盒，再将程序降温盒转到-81度冰箱16小时后转入液氮箱保存。（我们实验室一般不放-20度，当然放30分钟也可以，前提是程序降温盒转移时在室温下的时间不长）

作者: yeshch 时间: 2014-8-31 19:11

我们实验室的原则是冻存液现配现用效果很少。偶尔有多配的也是冻存于-80冰箱，并且一周内用完，否则效果不好得不偿失

作者: boyflour 时间: 2014-9-1 14:24

我们实验室用的冻存液和你的一样，剩余的冻存，一两个月还用，没什么问题。

作者: 184lj 时间: 2014-9-1 15:54

最好在冰上配置，现配现用。

作者: yuanyecat 时间: 2014-9-1 17:16

我们实验室用的冻存液一两个月还用，没什么问题。

作者: yuanyecat 时间: 2014-9-1 17:17

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我们实验室用的冻存液和你的一样一两个月还用，没什么问题。

作者: aochongyu 时间: 2014-9-2 11:45

最好是现配现用，但要是配的多用不了，我们一般就保存在4度，感觉冻在-20反复冻融不好，最好是现配现用吧，配好后放在4度一会再加细胞悬液

作者: tess1029 时间: 2014-9-2 11:55

最好先配现用，如果你要长期保存的话，建议还是梯度降温，最好是-80℃以下

作者: luoye1986 时间: 2014-9-2 16:18

应该不可以长期保存，我们都是现用现配，一次用完，剩余的也不会再用了，时间久了对细胞有损伤。

作者: baicaikua 时间: 2014-9-10 17:19

冻存液不能长期保存，最好现配现用，DMSO会见光分解。

作者: CELL007 时间: 2014-9-11 09:53

冻存液，一般现配先用吧。实在用不完，我做过的实验，在4度保存2周，再冻存细胞也不影响。我冻存时用的是程序降温盒啊

作者: deshenglll 时间: 2014-10-17 10:19

回复什么颜色的番茄的帖子, l- I1 _( C4 F8 o- X. ~5 k u4 F

最好现配现用。

作者: 晴斗斗 时间: 2014-10-17 10:41

我们实验室的也都是放很久都可以用，不觉得对细胞冻存有影响，请问现配现用是因为什么呢？

作者: xiaostou 时间: 2014-10-21 10:23

我们一般是现用现配，最多不超过1个星期。放太久了反复取用多了容易污染吧。

作者: 帝国黑骑士 时间: 2014-10-28 08:55

最好是现配现用，直接用fbs：dmso=9：1 方便好用。楼主配了50ml 你们要是东存量大的话放4摄氏度一周内用完还是可以的啊！吃一堑长一智没什么好伤心的，保持乐观的心态才能做好实验！加油！

作者: 大海之家 时间: 2014-10-30 09:21

回复 miltenyi 的帖子
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一般细胞可以在负80度保存多次时间为宜？各位大侠有没有经验，我需要冻存肿瘤细胞株，半年内用完，觉得没必要买液氮罐。$ l$ z* Z+ T0 R& r( [4 x' ^

作者: sc-cxw 时间: 2014-11-3 14:03

一个月没问题的

作者: sylar.wy 时间: 2015-2-4 13:55

放了几个月都没事- -

作者: sylar.wy 时间: 2015-2-4 13:56

回复大海之家的帖子, z8 f5 K' ?8 p9 U! C- X! t# ?9 H; f

放半年都没事。。就是越久复苏后活的细胞越少。

作者: baby00000003 时间: 2015-2-4 16:10

含有FBS的话，最好用新配的，个人直觉放冰箱冷藏1周还可以吧.....% x) `2 F' _4 H8 f2 k4 t; _" p( g
有些化学成分明确而且都是小分子的冻存液可以-20保存，比如dextran+DMSO之类的

作者: zxmflying 时间: 2015-2-27 21:56

可以用的，最好是现配先用。我们有时候也会放在4度冰箱超过1个月的，冻存效果也不错。

作者: scarletkiki 时间: 2015-3-11 21:59

一般都是现配现用

作者: zzstemcell 时间: 2015-4-17 16:24

配多了，锡箔纸包好4℃保存，可以用一个月。DMSO挥发性很强的

作者: jojo1988509 时间: 2015-4-17 17:01

一般都现配现用啊，又不麻烦，一次配那么多干嘛啊。我一般是先算好要冻多少管，一共需要多少ml冻存液，以需要10ml为例，我一般先加5ml培养基悬浮细胞，同时取4ml FBS在离心管内，1ml DMSO慢慢加到FBS内混匀，然后把这个慢慢加到细胞悬液，边加边摇，再分装到冻存管就完了，觉得现配现用也挺快的，没必要配那么多啊。

作者: iamzhangxiaoyu 时间: 2015-4-17 18:56

不应该放的太久，最好是现配现用。我们实验室配置好的冻存液一般放在4度冰箱，时间久了就不要了，配至好的冻存液更不能反复冻融的。在冻存细胞的过程中，加入冻存液混匀后装入冻存管后，直接放入程序降温盒，就可以放到-80度冰箱过夜再转入液氮箱保存。祝顺利

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2015-4-18 08:49

原则是一个星期，但有时用好久！没办法，领导要节约成本呢！

作者: chenlin080102 时间: 2015-4-29 11:35

这个条件也就个把月吧，建议还是液氮冻存吧，至少也得-80度

作者: nkcell 时间: 2015-5-4 15:07

放到-20度一两年都是没有问题的，放心吧

作者: avbn 时间: 2015-5-4 15:23

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原则上是现用现配的，不过短期保存在4度还是可以的，也要看你的细胞是不是娇气。如果是贵重细胞还是谨慎为妙，呵呵，做多了就有经验了

作者: edwardellen 时间: 2015-5-11 09:28

冻存液最好是现用现配的，因为血清是不好反复冻融的，所以化开以后一般都存在4度，在4度存放时间长，血清的的成分也会有分别改变，更何况你还加了DMSO。
你的冻存液里的血清比例也低了些，至少30%的血清才好吧，如果不是商业化的无血清冻存液，我们都是用90%的血清冻存的。3 o8 O. ^5 `- Y/ q! n8 ?
我的经验是在冻存细胞前，从冰箱里直接取出冷的血清，吸出本次需要使用的量，按比例加入DMSO，充分混匀，然后放进4度预冷，之后再进行消化细胞、标记冻存管、离心洗涤等步骤，等细胞收集好后，冻存液也就预冷完成可以使用了。 g) c( Z0 Y9 F+ K& E3 I
DMSO 保存是要避光的，配好的冻存液也要避光存放。

作者: daviddow 时间: 2015-5-27 17:15

4度都可以保存很长时间，一个月之类的。没有问题

作者: cyz3057 时间: 2015-5-27 21:17

我们的习惯是DMSO：血清=1:9，短期存放在4度，长期存放在-20度，建议避光。

作者: 老姜 时间: 2015-7-7 21:52

冻存液最好现用现配。因其DMSO有毒，其具有置换橡胶盖中的物质，是强的渗透剂，从而对细胞产生毒性作用。传统的做法不主张多配，若多配了，放置的容器一定要注意，防止将容器材质中的成分置换出来，对细胞生长产生不利影响。

作者: huqiao1649 时间: 2015-7-7 22:22

最好是更具你冻存的数量来配保护液，这样对细胞损伤更小。这样更经济环保哦！不要嫌每次配置很麻烦。实在有剩余的短暂放4℃冰箱，尽快用完。

作者: avbn 时间: 2015-7-14 12:01

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我们实验室都是现配先用的，不能长期保存，最好尽快用完，但是没做过这方面的验证试验。理论上血清不要反复冻融，有损营养成分导致降低冻存活率

作者: iamzhangxiaoyu 时间: 2015-7-14 17:40

最好现配现用

作者: 蜗牛爱贝贝 时间: 2015-7-18 16:30

推荐的是用之前30分钟到2小时内配，根据需要量配置，放4度冰箱预冷，如果配置的多了，就放4度，一周内用完就可以了，如果用不完，就扔掉算了，没多少钱，尽量不要放-20度或者-80度什么的，反复解冻，对以后冻存细胞效果不好，本来冻存复苏后活率就不高，这样一弄，就更低了

作者: xunway 时间: 2015-7-19 18:01

从我们的实践来看 & P$ ^# n* y4 b
冻存液 -20度可以放 1到2个月没问题
再久  就放-80度吧
冻存液不需要放液氮  也不需要程序降温
  g' x7 ^0 B, P+ a
楼主问的是冻存液不是冻细胞吧
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冻细胞需要程序降温 / ?0 S; y# R  [7 {* N  k! e! g9 J
在-20度不建议超过半天吧

作者: xunway 时间: 2015-7-19 18:02

冻存液的配方很多种
你这个配方也没有问题
你可以冻存然后复苏验证下即可

作者: wf78365421 时间: 2015-7-31 09:56

可以的，放到-20度冻存，可以放半年以上，放到2-8度冷藏，2周内用完都没有问题的。

作者: nkcell 时间: 2015-8-3 09:12

细胞冻存液也是有有效期的，有的是一年，我们实验室就是一年的，所以你自己配的可能也是有有效期的，还有血清是有有效期的，你的血清确定不会过期吧

作者: peng1281090563 时间: 2015-8-11 15:05

我们都是现用现配，用多少配多少% C2 b" T |: M/ n" E9 p

作者: jojo1988509 时间: 2015-8-11 20:49

我晕，一般都是现配先用的啊，这个东西又不费事，离心细胞的时候就配了，干嘛要配那么多啊，先说你血清反复冻融本来就不好，血清放在4度本来也不能超过2周，再说DMSO，本来就避光保存。

作者: 121qwq 时间: 2015-8-13 10:47

不能的

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