干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
实验室SOP
[打印本页]
作者:
张源
时间:
2014-9-3 10:13
标题:
实验室SOP
请问你们细胞实验室里用的SOP，怎么制定的 能发份看看吗？
作者:
jianglei_sd
时间:
2014-9-4 11:04
SOP是不可能发给你看的！
% p3 k: I! G, E% J% _
6 s) X) g, o+ t* k2 f
做SOP的可以按以下几个步骤来进行：
9 O3 G& r; L! K" V2 A7 T
1.先做流程和程序
& v- y% }0 L* D; h
按照公司对SOP的分类，各相关职能部门应首先将相应的主流程图做出来，然后根据主流程图做出相应的子流程图，并依据每一子流程做出相应的程序。在每一程序中，确定有哪些控制点，哪些控制点应当需要做SOP，哪些控制点不需要做SOP，哪些控制点是可以合起来做一个SOP的，包括每一个分类，都应当考虑清楚，并制定出来。
! ?8 Y: F* q) Y2 S
2.确定每一个需要做SOP的工作的执行步骤 对于在程序中确定需要做SOP的控制点，应先将相应的执行步骤列出来。执行步骤的划分应有统一的标准，如按时间的先后顺序来划分。如果对执行步骤没有把握，要及时和更专业的人员去交流和沟通，先把这些障碍扫除掉。
& E( U+ W- \# ]4 t6 C- ^3 y
3. 套用公司模板，制定SOP 在这些问题都搞清楚的前提下，可以着手编写SOP了。按照公司的模板在编写SOP时，不要改动模板上的设置；对于一些SOP，可能除了一些文字描述外，还可以增加一些图片或其他图例，目的就是能将步骤中某些细节进行形象化和量化。
: E3 c5 ?1 }: {. R
4.用心完善，努力实施
k4 }/ F4 j) N1 N+ Z3 L. C
由于编写SOP本身是一个比较繁杂的工作，往往很容易让人产生枯燥感觉，但SOP这项工作对于公司来说又非常重要，公司在这方面也准备进行必要的投放，特别是从时间用2到3年的时间来保证，因此我们必然用心去做，否则不会取得真正好的效果，甚至走到形式主义的负面去了。
) F i, ^6 ^ `0 @; ~. S8 O3 N
“认真做事只能把事情做对，用心做事才能把事情做好”，并用这句话和大家共勉
作者:
jianglei_sd
时间:
2014-9-4 11:04
本帖最后由 jianglei_sd 于 2014-9-4 11:05 编辑
; p/ B1 h0 [) r+ x1 N" f
S! |- L4 \/ c s/ w
多发了一遍，怎么删掉？
作者:
呼吸
时间:
2014-9-4 13:59
一般实验室的SOP都是根据自己实验室的实际情况制定的，怎么制定，制定成什么样要看你们实验室的具体情况
作者:
tim1403
时间:
2014-9-5 10:17
实验室的SOP那么多，也不可能全发给你看，而且，每个实验室也不同，所以你可以上百度文库找一些相类似的参考参考
2 A" I; a5 N6 I9 x
http://www.docin.com/p-517020343.html
/ A. j' o5 g5 Y1 E2 c/ Z6 [
http://wenku.baidu.com/link?url=4_6FFDKtzuq-Bzz_srw-v8f72oMsGgauUl1wFOi3VLh2KtwWGfRhbt5RwnPnc6KE-wv1A8a00nukZPxadvzFBaUYvWs3CaQF5I8U4tyAiya
$ [9 X9 D% w4 y: w
作者:
tim1403
时间:
2014-9-5 10:19
胚胎干细胞培养标准化操作规程(SOP)
; S: ~6 D4 r2 B. X1 k5 e- d
; X5 p+ f$ P$ z- z
目录
. A1 J- F A, `# q+ p9 N9 h
一、细胞
5 W2 b/ u) X8 A3 _
二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态
# q: `" S8 g9 S/ M [; Z
培养基
: x, ]8 m P' f Q! j1 m
细胞复苏
( M0 W n" d. ~+ [" }
冻存细胞
1 N) D7 {1 _! F* s( H) G% M
明胶包被
% p. I- a4 i# R' a; U9 G, M, n3 E
细胞传代
V8 c Y0 Z1 G* {( G6 u: b
三、体外分化
8 ~, D" H7 s" k- z% S
培养基
, q5 c* b) @7 s
包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）
# X! ?0 E+ ~8 d! {6 ~' z
体外分化方法
4 F" ~# E+ R. C5 l& g
四、移植细胞的准备
9 p* O1 \6 S C
4 H1 g) B2 G; I6 P5 t# i) p
细胞
* m! u3 g- R8 }# N
多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡
! {- h: x0 M. T3 v+ V5 C9 @, L
1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。
- ^+ ?' [ P" ~7 e( d( l
2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。
* d: \) @( ?9 I: J5 L6 ]
3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7－9代。
5 G; Q6 x0 l' E; Y, G2 O
4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。
8 C3 v# |. O, T2 d& s5 a2 d+ E
5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。
/ P6 Q$ H, \. W) W
0 Q' Y# I3 b8 r" Z- x4 d( z
一般培养--维持ES细胞处于未分化状态
$ Y h+ w }0 W1 N; D2 D
ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。
5 \, O; g" E0 v! e: W5 \) r7 Z
1 I' L1 u2 K: P
培养基
& t6 {& h2 q6 |( r6 }
ES:
5 h4 Y/ |" y- v. u' M
配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。
( ?8 x7 x0 \8 B% N* |7 B
7 p( k* H" N) y
贮存液
7 {7 _" T, B! p( }( ?) V- k; U
DMEM(高糖)
4 }2 f- q" p: G$ o
马血清（HS）
; U$ V6 d& l) u% n/ o
L-谷氨酰胺（200mM）
" v# O% v8 F8 W
MEM NEAA（10mM）
1 j3 b( K0 V7 J
HEPES（1M）
1 b/ ^, E6 v' H8 t) \# x
β-巯基乙醇（55Mm）
s4 D& Q% k2 o
PEST
1 l5 D. g. I" @& u, g
ESGRO
2 k+ d# W J8 M4 ^& Z
8 \5 _! i( T D% @6 t3 f. g: d
复苏细胞
! ^" o0 z1 C: p; ]. f
细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。
0 v5 @9 R3 H. R2 v
: {$ B, x0 Y$ A. ?. n; Q* H
Y! o- @1 T$ A/ {
3．将细胞转移到一15ml Falcon管中；
; M1 i, h/ ^9 m- a) ]8 l6 U- Q
4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；
; u; Z, T. z3 @( E8 R/ G( p
5．离心3分钟；
* B& a$ I6 z; d- G& ]
6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；
5 p V9 B, e: b
7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；
) j! l& ]) |/ n
8．孵育。
作者:
FYH
时间:
2014-9-5 13:57
这个最好实验室自己制定, 可以因地制宜,因实验者的需求为导向, 兼顾清洁有序高效的目标
作者:
chimo100
时间:
2014-9-5 14:40
这个是根据你公司自己的操作来写的，原则上“写你所做的，做你所写的”
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5