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标题:
实验室SOP
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作者:
张源
时间:
2014-9-3 10:13
标题:
实验室SOP
请问你们细胞实验室里用的SOP，怎么制定的 能发份看看吗？
作者:
jianglei_sd
时间:
2014-9-4 11:04
SOP是不可能发给你看的！
0 A0 S) l% {" K% U, Y
4 R! J& ]) G& V+ O2 x
做SOP的可以按以下几个步骤来进行：
0 R( v* N; h H0 F
1.先做流程和程序
3 B0 c$ A# I$ \0 |% a; w
按照公司对SOP的分类，各相关职能部门应首先将相应的主流程图做出来，然后根据主流程图做出相应的子流程图，并依据每一子流程做出相应的程序。在每一程序中，确定有哪些控制点，哪些控制点应当需要做SOP，哪些控制点不需要做SOP，哪些控制点是可以合起来做一个SOP的，包括每一个分类，都应当考虑清楚，并制定出来。
4 A5 F$ k' p+ v
2.确定每一个需要做SOP的工作的执行步骤 对于在程序中确定需要做SOP的控制点，应先将相应的执行步骤列出来。执行步骤的划分应有统一的标准，如按时间的先后顺序来划分。如果对执行步骤没有把握，要及时和更专业的人员去交流和沟通，先把这些障碍扫除掉。
' l. m. H/ v6 M9 j, w( c, K1 |9 C
3. 套用公司模板，制定SOP 在这些问题都搞清楚的前提下，可以着手编写SOP了。按照公司的模板在编写SOP时，不要改动模板上的设置；对于一些SOP，可能除了一些文字描述外，还可以增加一些图片或其他图例，目的就是能将步骤中某些细节进行形象化和量化。
# X& d; n8 g$ E) W5 { Y
4.用心完善，努力实施
4 R4 G9 _' D+ o4 l7 n- N. `$ G0 Z
由于编写SOP本身是一个比较繁杂的工作，往往很容易让人产生枯燥感觉，但SOP这项工作对于公司来说又非常重要，公司在这方面也准备进行必要的投放，特别是从时间用2到3年的时间来保证，因此我们必然用心去做，否则不会取得真正好的效果，甚至走到形式主义的负面去了。
( l- w+ v1 _( S( V6 Q
“认真做事只能把事情做对，用心做事才能把事情做好”，并用这句话和大家共勉
作者:
jianglei_sd
时间:
2014-9-4 11:04
本帖最后由 jianglei_sd 于 2014-9-4 11:05 编辑
; I+ m3 |' ~2 d/ J: R& _* X& Y
: b% V( ~, b: }2 ~ [
多发了一遍，怎么删掉？
作者:
呼吸
时间:
2014-9-4 13:59
一般实验室的SOP都是根据自己实验室的实际情况制定的，怎么制定，制定成什么样要看你们实验室的具体情况
作者:
tim1403
时间:
2014-9-5 10:17
实验室的SOP那么多，也不可能全发给你看，而且，每个实验室也不同，所以你可以上百度文库找一些相类似的参考参考
% p5 G4 E- o- Z; e+ I
http://www.docin.com/p-517020343.html
% R( s& s* m' e& I
http://wenku.baidu.com/link?url=4_6FFDKtzuq-Bzz_srw-v8f72oMsGgauUl1wFOi3VLh2KtwWGfRhbt5RwnPnc6KE-wv1A8a00nukZPxadvzFBaUYvWs3CaQF5I8U4tyAiya
+ {: t2 X5 w. x" o7 l- W
作者:
tim1403
时间:
2014-9-5 10:19
胚胎干细胞培养标准化操作规程(SOP)
) |5 ~5 C2 W E1 i9 j
6 }* l& [9 s$ j6 z4 ^; R% k
目录
5 T* e% J( g/ X+ ~+ ?. B5 x N
一、细胞
/ J5 {! N6 c) s+ p1 e
二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态
- s2 p2 t! ?2 t
培养基
! b/ X6 g/ W6 h; a! ?
细胞复苏
k/ s" t9 v: O/ p% p
冻存细胞
: p& h' p1 i5 F, e* e0 r4 x T
明胶包被
: | o. K3 `1 { c
细胞传代
4 n- w }0 K; ~/ G
三、体外分化
# i, C4 }' D' V7 ~0 J
培养基
% [% x) \8 K" m
包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）
( k4 Q, M( h+ D. B
体外分化方法
& d+ B x9 k7 c* P( w9 Y
四、移植细胞的准备
! B8 J" B! k+ u1 o4 z
( M! E8 G$ ]% o% J0 ?! Y
细胞
3 x8 [' P+ m) L3 T- E
多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡
3 @. R9 R1 [5 w5 H, f
1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。
# P) b( Z! g% n
2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。
; C8 L* ?. W$ x* s. H% F
3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7－9代。
$ R6 X6 v( ]& K
4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。
% ~3 x$ r# E8 a5 E9 [
5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。
8 m" ?% n6 ^! L5 U9 |. x1 K+ |7 \
0 l( @0 G( Y6 o2 E
一般培养--维持ES细胞处于未分化状态
/ t1 c6 @% I: Q! N+ `& S! x; L
ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。
; P& n. `! l% J) c4 n1 t5 v+ G
8 r L" S0 E* j2 B" ?
培养基
E1 q) L0 v- ?# D1 P& u) d
ES:
4 y8 v8 h& D% s9 H; G- R g
配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。
$ }; ~0 J9 K6 N
6 r; C- P3 @# _+ j# [2 w; n* B( R
贮存液
: R, f/ K7 q# M' y+ J7 ]
DMEM(高糖)
4 M+ O/ c3 K! w& C9 @+ [
马血清（HS）
: ~2 i( s2 L2 @5 I/ r [
L-谷氨酰胺（200mM）
$ R/ j' \0 O$ ?7 }% o4 O9 ]8 b4 ?# g
MEM NEAA（10mM）
( |% c6 l* U2 i; U9 q; ~* F: e
HEPES（1M）
( e; h1 D, ^: T% {0 N
β-巯基乙醇（55Mm）
( Y/ V) D4 w+ ]- B- W
PEST
+ M- J' R* }6 S& u- K
ESGRO
: R6 @/ D& q- d6 v0 x/ @4 I& B0 y
5 {! V7 b4 r0 i/ [3 {! O
复苏细胞
" m5 J5 F, l, `' B5 n
细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。
" M* j, w2 y7 |) E9 M
U4 z/ A: d2 F5 n5 C8 p W
' O5 L4 }8 W7 a# m# C! c; i
3．将细胞转移到一15ml Falcon管中；
& D( ~3 d$ d4 K
4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；
$ l! K" t3 m# p2 o! W+ }- F4 `
5．离心3分钟；
K0 B* Y6 U5 Q: j
6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；
: e1 ^$ z' `& u: B; q6 |* r$ A
7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；
1 _' X1 u7 g$ f) k9 p
8．孵育。
作者:
FYH
时间:
2014-9-5 13:57
这个最好实验室自己制定, 可以因地制宜,因实验者的需求为导向, 兼顾清洁有序高效的目标
作者:
chimo100
时间:
2014-9-5 14:40
这个是根据你公司自己的操作来写的，原则上“写你所做的，做你所写的”
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