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标题: 有关石蜡切片 [打印本页]

作者: yeshch 时间: 2014-9-9 09:12 标题: 有关石蜡切片

本帖最后由细胞海洋于 2014-9-9 10:05 编辑
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恳求各位前辈传授一些做好小鼠睾丸石蜡切片的技巧吧？尤其是一些容易出问题的地方，比如脱水，渗蜡，包埋，HE染色，免疫荧光等。小弟在此谢谢各位了！

作者: zhen022 时间: 2014-9-9 10:21

到网上找教程，按照教程来应该问题不大啊

作者: fuyinsheng 时间: 2014-9-9 12:59

按照常规步骤去做就行，需要注意的是渗蜡的时间根据组织块大小适当加长渗蜡时间，脱水，染色等步骤其实和常规也没多大区别，HE染色苏木精和伊红染色时间按4:1，自己按照正常步骤做下预实验也就摸索出来了。再一个就是固定要充分一些。
第一次做的话按照如肝、肾等组织的常规步骤来做，增加几个对比实验，两次以内就能摸索出来

作者: yeshch 时间: 2014-9-9 21:11

回复 zhen022 的帖子9 Q: W! {4 y. Q" P# Z

我是做得出来，但是效果不理想，我想做的更好，所以最好是向更有经验的人请教一些细节经验

作者: yeshch 时间: 2014-9-9 21:14

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多谢了！我做过几次了，材料是小鼠睾丸，切出来总是不完整；甚至材料边缘完整，而内部总有很大空隙，所以不太明白问题在哪里，会是脱水浸蜡没处理好吗

作者: fuyinsheng 时间: 2014-9-10 08:53

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两个原因，一个是固定可能没固定好，另外一个就是浸蜡不充分了，需要增加浸蜡的时间，不知道你是否分两次或三次浸蜡。另外如果你们实验室温度比较高的话建议将蜡块放在4度冰箱中保存，这样保证石蜡不会过软。

作者: fuyinsheng 时间: 2014-9-10 08:55

回复 yeshch 的帖子8 N6 B7 [+ z1 l/ F; x1 C
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通常切片内部中空都是浸蜡这块出的问题，而切片不完整的话固定和浸蜡都很重要了。你可以先调整这两部分，如果还是不行可以考虑减少脱水时间

作者: yeshch 时间: 2014-9-12 10:58

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怎么能分辨固定是否适当呢？（在刚固定完的时候）。我也考虑是浸蜡不充分，但三次浸蜡，并且第三次接近20h，应该足够了吧？我是保存在四度的

作者: yeshch 时间: 2014-9-12 11:00

回复 fuyinsheng 的帖子% q. t/ y/ M+ x4 X# z3 a7 G) K+ N

还要请教一下：我脱完水没有见到testes明显萎缩，反而是在包埋时发现皱缩的非常明显，这是什么情况？

作者: fuyinsheng 时间: 2014-9-12 12:43

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你固定是多长时间，你可以做个对照，一个固定时间是现在的时间，一个再延长一些。脱水时间是不是太短了，这些都要考虑到。另外三次浸蜡是没问题的，但是前两次浸蜡很关键也要考虑浸蜡时间。

作者: ytumuyangren 时间: 2014-9-12 15:30

固定组织选择不同的固定液，要求也不一样，我喜欢用4%的多聚甲醛固定组织，因为多聚甲醛相对比较柔和一些，不会对组织里的结构造成很大的伤害；固定结束后必须要充分水洗，目的是冲去残留的固定液，这个在做免疫组化的时候体现的尤为重要，免疫组合如果固定液去除不干净，会对组织内抗原抗体结合造成一定的影响；脱水，我们采用的不同浓度的酒精脱水，有的实验室会采用有酒精混合氯仿和正丁烷等一些有机溶剂来脱水，低浓度的酒精可以放置时间长一些，如果时间安排不开，可以放在75%的酒精里过夜，高浓度的酒精里不能放置时间太长，不利于后续的染色；浸蜡，我们一般是过夜浸蜡；切片以及常规的染色，就按照网上提供的方法进行，不会有太大问题；免疫组化，需要多用点心，这个做个2-3次就会熟练。关键还是在于练习，熟能生巧。祝实验顺利。

作者: yeshch 时间: 2014-9-14 11:22

thanks so much!我再做一批，不同条件再尝试一下

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