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标题: 求助 DMEM/F12特别容易变黄正常吗？ [打印本页]

作者: 听不到 时间: 2014-9-16 11:13 标题: 求助 DMEM/F12特别容易变黄正常吗？

我用的DMEM/F12养细胞，以前的时候是正常的隔天换液，换液的时候也不怎么黄的，可是现在就今天换了液，明天看就已经完全黄了，感觉很不正常，我先后用了Hyclone的现成的培养液和自己配的Gibco粉末的培养液，都出现了快速变黄的情况，想知道大家的DMEM/F12也容易变黄吗？

作者: ytumuyangren 时间: 2014-9-16 11:25

液体变黄时，细胞是否表现出异常，另外看看楼主购买的液体或者粉剂中是否含有Hepes。

作者: 刘彩云 时间: 2014-9-16 11:41

你配液的时候调ph了吗？还有那可能是渗透压有问题，你也应该测测。你看看细胞影响大不大。

作者: janhwa74 时间: 2014-9-16 12:33

是不是污染了?有些污染是看不出来的

作者: zhrt 时间: 2014-9-16 12:42

测测是不是支原体污染，如果不是在考虑培养液的事

作者: savid888 时间: 2014-9-16 13:33

不是变黄，而是颜色减淡，不像普通的培养基那样红。2 }" O0 {$ y. ?6 N4 Z( ]) d
DMEM/F12就是这样的，跟它的配方有关系，只要不是污染，放心用就是了

作者: yaolinzhang 时间: 2014-9-16 14:37

回复听不到的帖子( D4 S# j$ l' y: N

1.PH出问题可以加点缓冲液试试，比如hepes，NaHCO3；
2.细菌污染可以用0.22um的滤器过滤处理；

作者: 20084720113 时间: 2014-9-16 14:42

变黄很正常啊，我用的培养基都是有点黄，DMEM一般会比较红，只要细胞没污染就没事。

作者: woshibotao_01 时间: 2014-9-16 16:07

本帖最后由 woshibotao_01 于 2014-9-16 16:07 编辑

PH变化了吧！？试试加入缓冲物质。

作者: frankhu 时间: 2014-9-16 16:46

只要培养基是澄清的就好，变黄快的话可能是细胞代谢旺盛

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:42

回复 ytumuyangren 的帖子
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倒没有什么异常，但是我诱导用的它，自从易变黄后就再没成功过...是含有Hepes的

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:43

回复刘彩云的帖子; x" T% S/ ?# k4 \( A5 E
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肯定调ph了的，渗透压有什么问题啊？没接触过这方面啊

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:43

回复 janhwa74 的帖子& s2 i( \! q$ c7 Q- c

应该不能，至少不是染菌

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:45

回复 zhrt 的帖子
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啊，估计会是这个问题，但是我用DMEM养的同样的细胞就不会那么容易变黄，感觉不是这样的

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:45

回复 savid888 的帖子9 a0 Q& _; h* C3 M- B5 `
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那我就还是隔天换液就好呗？

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:46

回复 yaolinzhang 的帖子

Hepes是本来就含有的，我配的时候也是加了NaHCO3的...肯定没有染菌，这个我可以确定

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 09:47

回复 frankhu 的帖子

那我可以隔天换液吗？还是每天都换？

作者: frankhu 时间: 2014-9-17 10:30

回复听不到的帖子

看颜色变化，如果很黄，就每天换，但这种情况比较少见。

作者: jiojoo 时间: 2014-9-17 14:37

本帖最后由 jiojoo 于 2014-9-17 14:42 编辑

DMEM/F12确实颜色浅，但不一定算是黄9 G8 {2 f/ k1 x
看你以前配都会NaHCO3，感觉你会把偏紫的培养基当做正常pH哦
另外，你说的以前正常现在有问题的情况，是否细胞种类不同？

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 14:40

回复 jiojoo 的帖子

无论是买的液体或是粉末都是有Hepes的，细胞都是一样的，而且确定没有染菌

作者: 刘彩云 时间: 2014-9-17 18:56

回复听不到的帖子5 N0 v: ?' E7 ?! F
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你仔细观察一下细胞，或者做个支原体检测。

作者: 听不到 时间: 2014-9-17 20:11

回复刘彩云的帖子% T; S& [5 u# }$ M0 C

但是我细胞长得并不慢，这样是不是就可以排除支原体污染了呢？做支原体检测得要钱吧...

作者: hefan1234 时间: 2014-9-23 13:17

回复听不到的帖子) q; t4 T: @! c" ] D1 w
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我们实验室用的DMEM/F12也这样，但是我们加的培养基没有第二天就完全变黄，只是红色变浅，然后偏黄，可能跟里面的PH指示剂有关。如果培养基检测不是污染的话就没关系，细胞还是可以正常培养的。

作者: 听不到 时间: 2014-9-25 12:01

回复 hefan1234 的帖子
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那就好，我特别不放心，感觉一加进去就是黄的，就特别害怕对细胞会有影响，它是ph指示剂不是酚红么？

作者: hefan1234 时间: 2014-9-25 12:51

一般来说是酚红，很早以前我们自己用粉末配培养基的话也是偏淡黄色的，加点碳酸氢钠就会变红了，但是你的排除培养基污染这方面的问题，因为污染也会导致培养基变黄，特别是支原体污染导致培养基变黄但是还是清澈的，所以不像细菌和真菌污染会浑浊那么明显。

作者: lovesxj941 时间: 2014-9-25 16:50

DF12本身比DMEM浅，就容易变黄。变黄说明细胞液变酸。但是需要注意：1.污染，变黄而且浑浊；2.细胞密度过大；3.培养基暴露在空气中时间过长。

作者: yeshch 时间: 2014-9-26 10:57

回复听不到的帖子! m- y p- n6 c8 O V
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不一定，要看养什么细胞了呀！如果养MES就是要每天换液，而且当细胞量比较大时，每天换液黄的都比较快；其他的细胞可能就慢一些。除了培养液配方不同外，很大的原因可能就是ph变了，如果细胞没有出现明显异常，问题就不大。但是，最好做一下支原体检测，我们实验室有段时间出现类似情况，结果部分细胞检测出支原体污染。

作者: 听不到 时间: 2014-9-29 11:25

回复 hefan1234 的帖子+ Z3 ]1 |. E. [5 X
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赶脚我得试试支原体检测这个，但是完全不会啊...

作者: 听不到 时间: 2014-9-29 11:26

回复 yeshch 的帖子
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之前听说支原体污染是很常见的，所以一直默认我自己的细胞是有支原体污染的...但是对细胞生长有什么影响吗？感觉好像生长的都还好...

作者: yeshch 时间: 2014-9-29 16:59

回复听不到的帖子
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一般情况下，支原体感染的细胞确实不会出现很明显的症状，这也是支原体污染广泛的原因之一。但是，支原体污染过的细胞在某些基因的表达上是会受到影响的，比如支原体可能会抑制某些基因的表达。因此，有支原体污染的细胞做出来的实验结果就会受到质疑。所以发现支原体污染后最好及时处理，扔掉或者药杀。个人经验，仅供参考

作者: 听不到 时间: 2014-9-29 18:54

回复 yeshch 的帖子8 K. u3 [/ t. w/ j" J

懂了，谢谢啊( ~) F, N, }3 \9 j2 r3 K
还想问一句就是检测是否支原体污染有没有比较省钱的办法啊？试剂盒什么的应该是不会给买的...

作者: baby00000003 时间: 2014-9-30 12:01

先培养箱重新校准一次试试，有没有可能是减压阀调的太高，把培养箱的电磁阀冲坏了？

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