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标题: Taqman探针法——PCR体系的建立 [打印本页]

作者: xiaolong523 时间: 2014-9-25 17:10 标题: Taqman探针法——PCR体系的建立

1、引物、探针的设计：8 v; r0 R( O# _( N' n! C
   探针Tm为68-70℃ ，<30 bp, 5’不能有G，G可能会淬灭荧光素，3 C. h0 F* F4 u) r/ u
   引物尽量靠近探针，扩增片段<400 bp，引物Tm为59-60℃

2、反应参数的确定：
   一般为：94 ℃，10-20S& k& Q. m( f4 C+ e: ~$ F4 j
                     60℃，30-60S（Taq酶5′→3′外切核酸酶活性在60℃ 最高），也可通过温度梯度优化退火温度
                  & S. N( O) x$ u7 W8 ?9 M9 w
3、优化引物和探针浓度：获得最小Ct值，最大信号/背景比值
   引物浓度：50-900nM3 E- G4 E% {7 P+ m, Y( w2 s) G
   探针浓度：50-250nM

作者: Tlexander 时间: 2014-12-23 18:05

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" W% c3 E" a8 L) b) W8 W$ D
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