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标题: 如何确定嘌呤霉素的药杀浓度？ [打印本页]

作者: Yorkshining 时间: 2014-10-11 19:48 标题: 如何确定嘌呤霉素的药杀浓度？

如题，载体带嘌呤霉素抗性，想用合适的嘌呤霉素筛选细胞，这个具体该如何确定啊，望有经验的战友指点。。。

作者: 懵懂干细胞 时间: 2014-10-12 10:57

呵呵这个浓度还是摸索下的，不过在各种基因敲除文献里面都有参考浓度的，不一定适用你就是了，仅供参考。" x- B; | g$ f7 j
细胞数量不一样，浓度也会变化的！祝你顺利

作者: Yorkshining 时间: 2014-10-12 11:57

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谢谢回复我的意思是指具体如何摸索，主要指以几天内杀死所有细胞的最小浓度为标准，看到好多的都说法不一，有的说5-7天，有的说10-14天。。。

作者: cytobiology 时间: 2014-10-12 14:19

建议2-10ug/ml 的浓度梯度进行尝试摸索！- [+ L1 l6 V' u! g {( Q6 J f

作者: 懵懂干细胞 时间: 2014-10-13 08:56

回复 Yorkshining 的帖子

这是我当初的资料，在进行药物筛选过程中根据细胞数量可以在 0.5-1.0μg/ml 之间适当提高嘌呤霉素的工作浓度。
为了达到更好的药物筛选效果我们在筛选过程中使用过 0.8μg/ml 和 1.0μg/ml 两个浓度的嘌呤霉素进行筛选。
电穿孔转染后，会有少量的 ES 细胞死亡。电转两天后就可以进行荧光表达情况观察，但这个时候荧光表达率大约在 10%-30%，经过一轮嘌呤霉素药物筛选后可以将荧光表达率提高到 50%-60%之间，三轮药物筛选后荧光表达率高达 90%以上。每次药物培养48h之后用新鲜培养基再培养48小时复苏下细胞对细胞的活力有好处。

作者: Yorkshining 时间: 2014-10-13 15:23

回复 cytobiology 的帖子: u1 F/ ]- j9 L9 q
2 y+ }# J, a: d0 S
感谢回复，那么以几天内杀死所有细胞的最小浓度为后期试验用的浓度呢？

作者: cytobiology 时间: 2014-10-14 09:26

回复 Yorkshining 的帖子
, s! \) C& L9 B0 @5 D
三天左右。时间太短说明对细胞的毒性太大了，时间太长又会浪费太多自己的时间！

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