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标题: 如何提高FACS分选细胞的存活率 [打印本页]

作者: pujixing 时间: 2014-10-17 16:19 标题: 如何提高FACS分选细胞的存活率

本帖最后由 pujixing 于 2014-10-17 16:20 编辑 : ~& G+ `; P4 {$ b% R/ j4 e' q

想请教大家一个问题，如何提高流式分选出来的细胞的存活率？我们分选的是用GFP标记的胚胎干细胞。分选前后都加了ROCK inhibitor。
先谢过了。

作者: qingxingruyu 时间: 2014-10-20 16:49

流式分选活细胞,难度太大,首先:无菌操作就是个大难题.然后就是抗体内的防腐剂.建议分选活细胞还是用磁珠的好~~

作者: shaozi402 时间: 2014-10-22 09:32

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8 V' h8 C7 T/ l1 \6 u P2 T
流式分选后细胞存活率较低，没有什么好的办法，磁珠是个不错的选择，但准确率可能会差一些

作者: amanda1988 时间: 2014-10-22 17:13

磁珠分选效率会低一点，活性高。FACS分选的话加双抗，注意无菌，分选的液体里面加血清润管子。

作者: pujixing 时间: 2014-10-28 18:46

多谢以上各位回复。我的实验中涉及到GFP阳性细胞的分选，因此无法用基于抗体的磁珠。分选时用高浓度血清，加入rock inhibitor。我看资料显示降低筛选速率（sorting rate，由电压等参数控制）可帮助存活。我一般用的event是8000-10000/sec，资料建议的是3000左右。因此决定尝试一下。但速度降低后，同样的样本需要的时间可能会加倍甚至更长。

作者: goast8 时间: 2014-11-13 15:43

我觉得关键是分选前细胞的处理，分选中无菌防护，及分选后的快速转移到合适的培养环境中。: L6 u. A1 L N0 R4 |$ Z# ?0 W
我曾做过多轮基于GFP的293细胞的分选，效果都还是不错的。

作者: pujixing 时间: 2014-12-8 16:13

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