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标题: western blot用牛奶奶粉封闭时，必须用牛来源的二抗么？ [打印本页]

作者: me望梦成圆 时间: 2014-10-28 16:45 标题: western blot用牛奶奶粉封闭时，必须用牛来源的二抗么？

本帖最后由细胞海洋于 2014-10-29 08:11 编辑

用牛奶奶粉封闭时，必须用牛来源的二抗么？用其他二抗是不是会与封闭液中的蛋白结合呀？

作者: qingxingruyu 时间: 2014-10-29 08:45

你是为了赚威望啊

，二抗当然是抗你的一抗，不关脱脂奶的事儿

作者: heirrii 时间: 2014-10-29 09:10

不用

作者: 晴斗斗 时间: 2014-10-29 10:51

二抗是跟一抗结合，需要注意一抗的来源，二抗要是跟牛奶结合的话，那不是整张膜都是信号

作者: senmiao 时间: 2014-11-24 14:54

脱脂牛奶只是起封闭的作用，其他的封闭液还有FBS、鸡卵白等等，只不过牛奶便宜，还可以用过期的呢

作者: rileila 时间: 2014-12-12 12:49

这完全没有关系的，只是起封闭作用，负责抗体结合到板子上而已啊，不是吗？

作者: hansonyao 时间: 2015-3-6 09:58

没关系啊

作者: 蔚海橙天 时间: 2015-7-6 11:14

最好查一下你的一抗的说明书，看看是哪种来源的，然后根据一抗选择二抗，脱脂牛奶只是封闭作用不是选择二抗的依据。

作者: Jiangshi90 时间: 2015-7-21 21:53

可能会结合，但结合得不牢，洗洗就掉下去了，没有二抗先与特异性的抗体结合强

作者: luoan 时间: 2015-8-3 16:03

先搞清楚封闭液的作用，就不会提出这样的问题了：膜与蛋白的结合是疏水相互作用，刚转膜完时目的蛋白与膜相互结合，但膜上还有很多区域未结合蛋白，因此如果不封闭，一抗也是蛋白也会与膜疏水结合，高背景。封闭液是BSA或脱脂奶粉配成的，其蛋白成分会与未结合蛋白的膜结合，及封闭未膜上未结合蛋白的区域，这样就防止了一抗的非特异性结合。封闭液跟二抗根本没啥关系。

作者: 冰百叶 时间: 2015-8-19 17:43

不一定要用牛来源的二抗，只要二抗不与奶粉反应就可以。个人觉得若是用牛来源的二抗效果可能会更好。

作者: fation 时间: 2015-8-21 04:28

完全没有关系。二抗是针对你使用的一抗，必须和一抗一致。牛奶只是封闭的作用，和抗体没有啥关系。

作者: xiaoxiaodeji 时间: 2015-9-10 00:29

你要弄清楚你的一抗是什么来源的，在选择相应的二抗，这跟你用什么做封闭液没有太大的关系，但是封闭液封闭后，敷二抗之前，最好还是充分洗涤除掉多余的封闭液比较好。

作者: 121qwq 时间: 2015-10-22 10:30

不一定，10%BSA页可以

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