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请问WB封闭到底是BSA好用还是奶粉好用？
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作者:
yinchong42
时间:
2014-10-29 12:31
标题:
请问WB封闭到底是BSA好用还是奶粉好用？
本人PHD一年新生，做WB每次用BSA不论多大浓度必出杂带，用奶粉则极少有类似问题，请问大家是否也有过类似的经历，谢谢！
作者:
wangshan
时间:
2014-10-29 13:09
做WB一般很少用BSA封闭，5%的脱脂牛奶含有的蛋白比较全面，封闭比较完全，非特异性结合少。
脱脂牛奶物美价廉。
作者:
qingxingruyu
时间:
2014-10-29 13:34
没用过BSA封闭，听你这么一说，更不会去用了
作者:
moluxingke
时间:
2014-10-29 13:41
脱脂牛奶封闭在western blot中是一种很常规的方式，一般实验室都在用。
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而BSA封闭倒是可以在做免疫组织化学的时候用，虽然贵点，但是用量较少。
作者:
aulenuyah
时间:
2014-10-29 17:14
有一些蛋白用奶粉很好，有一些用BSA比较合适。得具体问题具体分析。可以在开始的时候试试
作者:
yaolinzhang
时间:
2014-10-29 19:09
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yinchong42
的帖子
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WB一般用5%的脱脂牛奶
作者:
xiaostou
时间:
2014-10-29 22:31
我们都是用脱脂牛奶，没用过BSA。
作者:
wagumaxida
时间:
2014-10-30 10:29
BSA用在免疫组化这种特异性较强的实验中效果好，脱脂牛奶封闭更全面适合wb
作者:
yinchong42
时间:
2014-10-30 13:53
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aulenuyah
的帖子
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u) O, J5 d% I3 J g/ Y. U
也有说是分公司考虑，似乎abcam和cst公司的更倾向用BSA，不过我做cst的β-cat，BSA封闭还是跑得全是杂带……
作者:
晴斗斗
时间:
2014-10-30 14:06
我们做WB用的10%的脱脂奶，有一些抗体也是有杂带的，可以在孵育二抗的时候加点脱脂奶去除杂带；BSA比较贵，据说标磷酸化的抗体的时候，用BSA效果比较好
作者:
aulenuyah
时间:
2014-10-31 08:58
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yinchong42
的帖子
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9 l+ B" s3 B) N# ^4 Y: u
个人感觉， 最好事先试验一下，每个抗体都不是很相同
作者:
wuzhoulingxiao
时间:
2014-10-31 09:11
奶粉里面含有磷酸酶，会将含磷酸基团的蛋白给去磷酸化，所以做WB还是建议用bloking buffer，效果是最好的。
作者:
tiramisu
时间:
2014-10-31 09:30
我们实验室做WB也都是用的脱脂牛奶，杂带也很少。没用过BSA。
作者:
sc-cxw
时间:
2014-11-3 13:59
我们通常也是用5%-10%脱脂奶粉。
作者:
妖妖空
时间:
2014-11-3 14:46
以前的时候每次都用牛奶封闭，后来发现不封闭也没有啥影响，后来就去查了资料，之所以封闭，是因为以前NC膜的工艺问题，后来的工艺进步后，基本不需要封闭了。所以我现在做WB都不封闭了。但是要是检测抗体效果的话，当然还是封闭一下号。做DB的话，是需要用BSA封闭的。
作者:
yeshch
时间:
2014-11-4 08:49
我们实验室都是用的5%脱脂奶粉，效果很好；不但较便宜，而且四度保存可重复利用两三次；BSA一般做免疫荧光或者组化时采用
作者:
yinchong42
时间:
2014-11-10 09:17
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妖妖空
的帖子
; D5 Q% F: d6 R/ t9 A
! P8 K( O: Y1 l6 v) P' C+ `! A7 _
非常感谢你的经验，我听说中山大学那边做wb也从来不封闭，不过就我做的经验来看，不论一抗还是二抗，抗体孵育的时候不加奶粉就会有杂带，不知道你们是否也有这种情况？
作者:
yuanyecat
时间:
2014-11-10 10:10
1.从价格方面考虑，脱脂奶粉便宜，而BSA的价格很贵。
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2.从封闭效果来看，两者效果相当，但是BSA的封闭效果更好，个人经验。
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综合两点，所以国内很多做WB时，都才用即经济又实惠的10％脱脂奶粉。
作者:
chenchunlei
时间:
2014-12-18 13:01
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yinchong42
的帖子
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我们硕士期间全部用BSA
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作者:
daviddow
时间:
2014-12-19 11:10
5%牛奶
作者:
naturehu
时间:
2014-12-22 11:07
磷酸化抗体的时候还是选BSA，只是洗膜的力度自己需要好好把握。一般的就用5%脱脂奶也可以。
作者:
鬼赦秉
时间:
2014-12-23 14:22
看你做什么实验吧。我们做if比较多，上司说BSA是最好的blocking buffer，其次会用serum，最后才会选择奶粉。
# \" y4 J0 M; Z6 ]! X
不过我就只用过goat serum 和BSA. 没有用过奶粉……
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之前用goat serum的时候效果还蛮好的，昨天第一次用BSA，今天看看效果怎么样
作者:
sc-cxw
时间:
2014-12-30 15:30
脱脂奶粉便宜又好用
作者:
liuyasi2008
时间:
2015-2-1 18:56
我们一直用的1%的酪蛋白，和5%的脱脂奶粉效果差不多，不过脱脂奶粉比酪蛋白贵一些用的费一些。
作者:
zxmflying
时间:
2015-2-27 21:54
看你的情况了，我们一般是用脱脂奶粉做，如果效果不好也会考虑换用BSA，建议你自己根据自己的实际情况去摸索比较一下。
作者:
splinkerette
时间:
2015-3-4 11:19
封闭和一抗一般都是用的5%的脱脂奶粉，二抗用2.5%。。偶尔做磷酸化抗体的时候，尝试用过BSA，背景确实会多很多。 总体看来跟题主的情况类似，奶粉杂带少，BSA杂带多
作者:
zhu1019
时间:
2016-8-26 10:17
一般蛋白做wb用5%脱脂奶粉即可，奶粉的封闭效果比BSA好。磷酸化的蛋白要用5%BSA，因为奶粉中含有磷酸化的酪蛋白，会出现非特异性条带。
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脱脂牛奶物美价廉。