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标题: BMSC腺病毒感染 [打印本页]

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作者: liukuantj    时间: 2014-10-30 20:43     标题: BMSC腺病毒感染

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
3 B* Y; \6 Q5 A1 ?  r$ |5 Z1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。& ]( t7 ~) e8 S. \% O5 t9 J
2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。
3 M8 }1 b6 p- T9 w% R! G3，是否需要添加prolygrene?怎么加？
% Z5 L9 O# d0 B9 I2 Q/ B  R4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？" d8 S8 \8 t, q* w# I4 X
谢谢！

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作者: luyue6453    时间: 2014-11-1 14:05

回复 liukuantj 的帖子4 _5 J/ I" Z! C; `& [9 ^

% n; G, g0 k, w6 E你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。

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作者: liukuantj    时间: 2014-11-6 12:18

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43 6 a0 a/ J* }3 V& o8 v
各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
- |( u1 k& Z7 o  B$ m$ ]1，我查了文献 ...

8 e3 u0 R7 a2 r/ ?) S- Q! h# P谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

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作者: 三木一叶    时间: 2015-5-25 20:35

回复 liukuantj 的帖子' f8 R' a) `8 Z; H) X( z
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直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？
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我最近在做干细胞的转染，好难转啊

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