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标题: BMSC腺病毒感染 [打印本页]

作者: liukuantj 时间: 2014-10-30 20:43 标题: BMSC腺病毒感染

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。9 [' `' e0 u3 G4 Q+ r
2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。
3，是否需要添加prolygrene?怎么加？
4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？# @9 P' m) u. _% c$ `5 i7 [
谢谢！

作者: luyue6453 时间: 2014-11-1 14:05

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, k1 M; B$ G' h6 w/ b
你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。

作者: liukuantj 时间: 2014-11-6 12:18

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43
; H# ]4 i; D$ Z+ X( J各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。% Y( [' A% R. d; f
1，我查了文献 ...

+ k q& t) T* L* P7 X
谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

作者: 三木一叶 时间: 2015-5-25 20:35

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直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？! `" u- _/ y. N; D

我最近在做干细胞的转染，好难转啊

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