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标题: 求助，想知道我的骨髓间充质形态是不是正确 [打印本页]

作者: 听不到 时间: 2014-11-7 17:22 标题: 求助，想知道我的骨髓间充质形态是不是正确

如图，是我养的F5代大鼠骨髓间充质，但看细胞形态感觉不对，完全不是梭形的，我从F0代就是这样的，所以才一直养了起来，但是现在越养越觉得不对，就觉得不是，求教，有人知道我这可能不是骨髓间充质吗？2 ?( B. I# J. x% f9 E4 U
我就是用的全骨髓贴壁法提的细胞，然后接下来是通过控制消化时间来纯化细胞，我大概消化时间是1分钟，然后终止消化后不吹瓶壁，直接取细胞悬液来离心，然后就养成了这样...' V7 z1 y" j$ v/ @: N+ J
想知道如果我这个细胞不是骨髓间充质的话，我的操作步骤里哪里错了呢？[attach]65297[/attach][attach]65296[/attach]

作者: yaolinzhang 时间: 2014-11-7 17:43

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细胞类型没错，状态出问题了

作者: amanda1988 时间: 2014-11-8 11:10

接种密度稀了点，有老化

作者: hefan1234 时间: 2014-11-8 12:02

原代到5代都这样的话，的确是有问题了，你是传代当天贴壁这样还是传代后几天都这样，感觉接种密度小了。

作者: 听不到 时间: 2014-11-9 09:57

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请问是出啥问题啦？从大鼠体内提出来的时候就是这样了，现在我已经不知道啥样才是正常的骨髓间充质了...

作者: 听不到 时间: 2014-11-9 09:57

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可是密度大的时候也基本是这样的...

作者: 听不到 时间: 2014-11-9 10:04

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我没看过...我都是传代后就不看了，然后隔天来换液，就发现贴壁挺多，但也有没贴壁死了的，是接种密度少吗？我都按最多是1:3传的，应该是我没等他长到80%就传了吧...

作者: hefan1234 时间: 2014-11-9 11:53

本帖最后由细胞海洋于 2014-11-10 08:51 编辑

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按道理1传3应该比1传4长得快，但是你说没到80%就传了，我也不清楚具体是百分之多少，我传一份具体参照给你吧。

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-11-9 12:26

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好资料多谢前辈话说前辈们原代和传代的时候都会计数么？我不是自动的计数就在显微镜下自己数好痛苦~

作者: ytumuyangren 时间: 2014-11-10 11:20

看着细胞老化很明显，营养不良。

作者: luckyliu 时间: 2014-11-10 11:50

是细胞接种的密度太低了，形态是对的，建议消化后接种到小一点的培养皿里恢复一段时间后再传代

作者: yiwuya007 时间: 2014-11-10 12:35

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看到那么多点点，老化了，

作者: Amberpure 时间: 2014-11-10 18:12

我也养到过这样形态的，问了好多人，应该是老化了，我考虑跟消化有关，现在状态满满好了点。

作者: 听不到 时间: 2014-11-10 18:48

回复 Amberpure 的帖子1 y j7 U4 W0 R/ f& \4 D$ c
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你咋弄的状态能养好啊？

作者: 听不到 时间: 2014-11-10 18:49

回复 yiwuya007 的帖子

我也不知道为啥那么多点点，我血清是gibco的，按说是不脏的

作者: 听不到 时间: 2014-11-10 18:49

回复 luckyliu 的帖子

那我密度高着养一段时间之后能好嘛？

作者: 听不到 时间: 2014-11-10 18:50

回复 ytumuyangren 的帖子; T$ @( X9 u2 U8 H
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不能营养不良啊，我用的Gibco的血清了...

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-1-16 23:42

回复 hefan1234 的帖子

前辈您传的这个资料里原代时0.3or0.35*105/cm2 传代时5.0or6.0*103/cm2 都可以是吗原代差不多是传代的十倍我们

一传就老细胞稀疏

作者: hefan1234 时间: 2015-1-17 12:37

回复倒腾细胞的帖子* Q0 e4 a% a' I* E2 Q1 p
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应该不会啊。你们是怎么提取和培养的呢？一般骨髓的量比较少，提取的干细胞含量也较少。如果用直接培养法来培养，杂细胞的含量很高，所以接种时的密度较高。换液后杂细胞大多被清除，传代时细胞纯度较高且已经适应培养环境，所以传代接种时密度要远低于原代培养。一般来说原代细胞长到80%及时传代，可以稳定传很多代的。建议使用含胎牛血清的培养基，消化操作时用旧培养基来终止消化。如果原代细胞是经过流式细胞仪分选得到的细胞，可以降低原代接种密度。

作者: hefan1234 时间: 2015-1-17 12:40

回复倒腾细胞的帖子5 i. n7 G0 I( W& v( O% l
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你们培养的是什么细胞，原代培养几天传代，传代后培养几天再传代？

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-1-17 23:17

回复 hefan1234 的帖子

用旧的培养基终止消化除了节约成本还有其他原因吗

养的是SD大鼠啊～原代5到7天就可以传传代后2到3天又传基本上就扁平粗大生长缓慢了
很懒不计数真的是个坏习惯

作者: hefan1234 时间: 2015-1-18 11:35

回复倒腾细胞的帖子9 |2 ?" r! X1 Z. e5 S0 M

用旧的培养基主要是为了终止消化作用，消化过头对细胞的伤害也很大，细胞容易提前老化变形。看你传代的时间也正常啊，怎么会传代稳定性很差呢，你可以试一下原代长到90%传，以后长到80%传，如果嫌计数麻烦，也可以根据培养瓶和培养液体积传代，一般是1穿3或4。

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-1-19 14:10

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哦哦前辈如果用传代的细胞来加药细胞种植密度可以不用按传代的密度来吧？那样好少

作者: hefan1234 时间: 2015-1-19 16:38

回复倒腾细胞的帖子 _: ~- }% K2 i2 I3 [6 s& C

你做的是什么试验呢，你的药物是用DMSO溶的吗，有用含胎牛血清培养基稀释吗？具体传代密度要根据你的实验需要来调整，我资料上的传代密度只是普通的培养实验。

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-1-19 18:40

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soga

我给MSC加TLR激动剂前辈有经验吗

作者: hefan1234 时间: 2015-1-20 08:19

回复倒腾细胞的帖子% A7 x# r+ p* a' T

抱歉，我没有做过这个实验，给不了你建议了，只能精神上支持你，祝你试验成功！

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-1-20 20:57

回复 hefan1234 的帖子
; a8 A; U4 w1 n! c, h; O
谢谢

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