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标题: 承接上次细胞传代以后不增值的帖子 [打印本页]

作者: jinhaifeng 时间: 2014-11-19 15:54 标题: 承接上次细胞传代以后不增值的帖子

本帖最后由 jinhaifeng 于 2014-11-19 15:55 编辑 * `: L5 s& o% M' K
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[attach]65534[/attach]，这是消化完以后接种时的形态，显微镜是IX41 4倍镜观察，就是这种细胞接种后基本不增值，是污染的情况吗？这是培养的脐带间充质干细胞

作者: hefan1234 时间: 2014-11-19 16:10

本帖最后由 hefan1234 于 2014-11-19 16:10 编辑 ' f' f6 ^' B& T3 t |
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你这是成像拍照系统拍的吗，为什么看到的细胞这么少啊，还有传代前的照片呢，主要是看贴壁时的照片啊，这张照片只看出来细胞少，平均圆度低，结团率稍高。

作者: jinhaifeng 时间: 2014-11-19 16:28

[attach]65535[/attach]这是消化之前的，因为一直没怎么增值，所以密度比较小，而且换过液以后还是比较脏

作者: yaoguanping 时间: 2014-11-20 12:29

你接种的密度太低，没有密度依赖，长不起来。
背景不是很清晰，脐带原代MSC有没有消化好？( X8 M3 v' c3 P9 A
建议干脆丢掉，从新再做一次原代试一试看。

作者: hefan1234 时间: 2014-11-20 12:58

回复 jinhaifeng 的帖子( _) W5 |! b9 t

如果检测培养基没有微生物污染的话，那就应该是你初始接种密度太低了，导致细胞长不起来，从这张图来看的话，细胞的确太少了，形态也不怎好。如果还有细胞系的话就重新培养吧，加大初始接种密度，试一下用含胎牛血清的培养基来培养。

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-11-20 13:50

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前辈一般2、30g的大鼠接种多大的瓶密度低了确实没办法长

作者: menghy 时间: 2014-11-20 14:21

从消化前的细胞照片看，细胞形态也不好，密度低，这样的很难生长。你要考虑培养基系统，集中密度。

作者: hefan1234 时间: 2014-11-20 15:20

本帖最后由细胞海洋于 2014-11-21 08:20 编辑
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回复倒腾细胞的帖子
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我原来以为你培养的是人骨髓间充质干细胞？你是培养小鼠骨髓间充质干细胞吗？培养人骨髓间充质干细胞一般用percoll分离法，小鼠小鼠骨髓间充质干细胞一般用直接培养法（全骨髓培养法）。你把小鼠股骨和胫骨的骨髓腔冲洗干净的话不应该细胞这么少啊，一般在学校实验课都做过啊。而且小鼠骨髓间充质干细胞本来就很难消化，而且长得也慢，一般第5天才进对数期，到9-10天进入平台期，你这照片是第几天拍的啊。

作者: cyagen 时间: 2014-11-21 10:25

图片看上去基本上没有MSC哦，建议调整下培养体系，大鼠MSC我们一般选择4周龄的，取后肢股骨和胫骨用全骨髓贴壁法进行培养

作者: 彩云子 时间: 2014-11-21 14:07

消化之前的照片没有对好焦吧，几乎看不到MSC，能看到的成纤维状的细胞状态也很糟糕，老化很严重。这是第几代的细胞？) k1 V+ E, H8 Z5 W$ \ n
消化传代后的细胞状态也不好，密度太低了。
还是重新养吧。要好好确定一下细胞培养体系，接种密度。

作者: 倒腾细胞 时间: 2014-12-21 17:22

回复 cyagen 的帖子% {. J: v# z) u2 e! t. }

4周的？前辈我们一般选2周的~ 前辈脂肪来源的是不是比骨髓来源的好养呢？另外箱子里的二氧化碳浓度满足不了5%对细胞影响大么？

作者: chenchunlei 时间: 2014-12-22 14:53

回复 jinhaifeng 的帖子

你下次再【拍照的时候可以调整一下镜子的白平衡，那样照出来的图片可能好看一些，你这样比人没法给你看，感觉你这个视野下就没有什么细胞，下次上传两张好看些的图片

作者: cyagen 时间: 2014-12-22 16:03

回复倒腾细胞的帖子

我们的经验4周的比较好提取，脂肪来源的相对难养，二氧化碳浓度需保证5%的

作者: 791849046 时间: 2014-12-23 09:56

传代前的细胞密度过低，而且细胞形态很不好哦，传代前的细胞已经没有MSC的标志性形态，还是从新培养吧。

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