干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 求iPS初期克隆图！万分感激 [打印本页]

作者: 葱葱 时间: 2014-12-9 17:33 标题: 求iPS初期克隆图！万分感激

本人在做iPS，用的无饲养层，有克隆形成，但总感觉是太密所致。挑出来的细胞消化成单个细胞长不成克隆。挺奇怪的。哎！郁闷！

作者: heirrii 时间: 2014-12-9 21:17

没有feeder 细胞，不用挑单克隆。用EDTA消化成小细胞团，传代

作者: scottist 时间: 2014-12-10 10:02

需要消化成单个细胞，是做miPS？无饲养层的话最好用2i培养基，如果是做hiPS的话，消化成单个细胞很快就分化了，最好是团块传代。

作者: 葱葱 时间: 2014-12-10 12:14

回复 scottist 的帖子

我做的是绵羊的。消化成单个长不成。

作者: 葱葱 时间: 2014-12-10 12:15

回复 heirrii 的帖子& p- {+ Y9 d2 ]1 m
+ c8 t; g7 p+ N$ [ |; ], _
可是，存在没有诱导成功的细胞，它们会增殖的。

作者: Andyhigh 时间: 2014-12-15 22:02

回复葱葱的帖子1 G8 Y+ u3 F [, r9 j
% _7 U5 l L& Q" Z2 e
绵羊的不好做哈，好像这方面的文章比较少，自己最近也做了下，发下有克隆，但效率好低！

作者: 葱葱 时间: 2014-12-22 11:42

回复 heirrii 的帖子

恩！可是初期有很多很克隆。但不确定是不是？还有一些未变化的细胞，所以必须纯化一下。

作者: 葱葱 时间: 2014-12-22 11:43

回复 scottist 的帖子

长的像葡萄状，挑之后消化一下，就长不成了！

作者: 葱葱 时间: 2014-12-22 11:44

回复 Andyhigh 的帖子+ H) J+ O7 C( u r3 y- R
( k: Y3 }: F' j
你也在做绵羊？

作者: Andyhigh 时间: 2014-12-22 13:38

回复 heirrii 的帖子" b! J* R2 {6 X6 E8 S+ k

想问下你做个相关的试验嘛，你的"EDTA" 是指含有胰酶的EDTA，还是指其他什么试剂呢? 求解，目前我的iPSCs 克隆不是很好消化```

作者: duwenjing 时间: 2014-12-23 19:38

我消化是用的0.25%的胰酶，挺好消化的

作者: Andyhigh 时间: 2014-12-23 20:50

回复 duwenjing 的帖子% y/ _& C) g; [/ x
1 E: E, K" C( P; f
胰酶不会引起细胞分化嘛？

作者: duwenjing 时间: 2015-1-15 21:17

不会哦，你也可以用胶原蛋白酶IV消化，这个消化后饲养层不会掉下来，比较干净！

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)