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标题: 脐带MSC处理方法分享 [打印本页]

作者: Ivan0108 时间: 2015-1-14 10:32 标题: 脐带MSC处理方法分享

本帖最后由 Ivan0108 于 2015-1-14 10:38 编辑

1.准备足月生产胎儿的脐带要求孕期无任何不良疾病并且取得过程中在无菌条件下进行，将其浸入1%的双抗(请链霉素)DMEM培养基中，使用玻璃容器密封好运送至实验室；
2.获得的脐带置于生物安全柜中剪取10cm长度用生理盐水将其中的血污清洗干净；9 X! O! H7 |( b0 Z; ]; u
3.任取脐带一端用解剖刀在离顶端1厘米处的圆周把外表皮划开，然后用夹子将其固定住，再取两把镊子用力将外表皮撕下，接下来再将两根动脉血管分离，最后将静脉内皮剔除；+ r- ~4 L: L3 W. I) o& R+ B
4.分离干净的脐带按1mm²毫米大小剪碎成肉肉块；
5.准备150cm²厘米的培养瓶，然后将其平倒，把已经剪碎的脐带组织铺满瓶身(在剪块时要求每个小块大小合适，瓶子中铺脐带时也需要放置均匀)；
6.小心反转将培养瓶倒置，放入37℃5%CO2培养箱中，在细胞贴壁一段时间后在培养瓶中加入脐带间充质原代培养基后小心翻转培养瓶，这时注意不要冲起组织块。
7.细胞培养5天后更换脐带间充质原代培养基继续培养，10天后可以使用培养基进行传代培养。
这种方式最大的优势在于，原代培养时并没有使用到消化酶，这样就能够保证细胞的纯度，完全依靠细胞自身的能力离开脐带组织贴壁生长。培养出的细胞会更加健康更加纯净，并且操作简单不容易失败。1 N n0 V/ m' Q, D4 C! Y

作者: jingbocn 时间: 2015-1-15 22:06

谢谢！

作者: 理一2010 时间: 2015-4-14 11:37

为什么要反转培养瓶？剪碎的组织块自身就有粘性，可以直接粘附到培养皿/瓶底部

作者: 呵呵 时间: 2015-4-14 15:30

回复理一2010 的帖子

我想可能是帮助组织块更好的贴在底部

作者: 理一2010 时间: 2015-4-14 19:45

回复呵呵的帖子
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听说过这种做法，但是我不太认同这种做法，因为细胞较长时间没有培养基，会影响细胞的

作者: 理一2010 时间: 2015-4-14 19:45

回复呵呵的帖子
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听说过这种做法，但是我不太认同这种做法，因为细胞较长时间没有培养基，会影响细胞的

作者: 呵呵 时间: 2015-4-15 17:13

回复理一2010 的帖子
3 d/ m. d/ F& O! E( T
初次贴壁倒置时是有培养基的吧。我们的组织块会用培养基浸润，是有培养基的。然后24小时正置再加培养基

作者: chxq 时间: 2015-4-18 16:52

谢谢分享

作者: hwlightning 时间: 2015-4-20 10:57

回复 Ivan0108 的帖子 A& e$ g4 Y; H2 a; T7 d: e
% v& E$ e- x: U, ~9 O* H
外表皮有那么好撕下？不用先剪成一小段再剥？

作者: dchingb 时间: 2015-4-20 14:02

臍帶組織有點螺旋纏繞，如果以解剖刀劃開是否會割到動、靜脈血管?

作者: zhrt 时间: 2015-4-20 14:20

回复理一2010 的帖子

不会有影响的，这是倒置法，可以先倒置2-3h在家培养液

作者: 309208770 时间: 2015-4-29 11:02

组织块铺完，先不加培养液，为什么要倒置？

作者: 309208770 时间: 2015-4-29 11:02

回复 Ivan0108 的帖子2 f0 @ F. G% X6 g& a8 I2 x7 o! B

组织块铺完，先不加培养液，为什么要倒置？

作者: chenlin080102 时间: 2015-4-29 11:28

谢谢分享

作者: chenlin080102 时间: 2015-4-29 21:30

我们使用的是酶解法，方法简单，五天就能长出很多细胞并且均匀，贴壁法费时而且经常出现爬不出来的现象，纯度我觉得不错，一直用这个方法

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