干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 如何提高慢病毒感染NK-92和T细胞效率 [打印本页]

作者: txy_love 时间: 2015-1-22 11:09 标题: 如何提高慢病毒感染NK-92和T细胞效率

如题，请各位有经验朋友提高宝贵建议，目前实验转染效率太低，在荧光显微镜下基本看不到荧光，求助ing。

作者: zzyhelixinxin 时间: 2015-1-23 13:21

细胞感染效率主要有以下几点需要注意：# U# z; `9 \, p9 z. `. B$ A
1.MOI值可以试着模式一下，一般慢病毒系统的MOI值在45-80不等；- _ u k( e- L8 e ]
2.细胞的状态也会影响感染效率，所以在感染慢病毒时尽量在细胞状态非常好的情况下进行；& e: I- N1 ^$ h0 b4 a& N% N: M
3.感染的时候加促感染试剂；2 m, I' [4 m* D7 G$ a% Y
4.病毒的滴度和纯度要高

作者: txy_love 时间: 2015-1-23 21:16

问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

作者: 细胞海洋 时间: 2015-1-25 23:51

回复 zzyhelixinxin 的帖子
& ~: s( |! B$ n1 X; ?* ^
看3楼

作者: 细胞海洋 时间: 2015-1-25 23:51

回复 txy_love 的帖子) O- r, \" \& @

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样
' P) v) ^6 c7 v/ C2 @2 H
否则他会看不到' C! [5 a1 l3 T' e% S

作者: txy_love 时间: 2015-1-26 11:22

回复 zzyhelixinxin 的帖子
/ n2 D: ?3 T: }& Q5 I
问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

作者: zzyhelixinxin 时间: 2015-1-27 13:02

回复 txy_love 的帖子

体外实验10（7）IU/ml的病毒滴度偏低，若你的细胞是比较难感染的细胞，这个滴度基本没有多大用处，病毒滴度在10的8次方效果会好很多。

作者: txy_love 时间: 2015-1-27 15:09

回复 zzyhelixinxin 的帖子( v( f8 b; _6 ?/ d6 E

细胞的确比较难转，不知道你可用过millpore的纯化柱浓缩病毒上清？与超速离心相比，浓缩的病毒滴度大概要低几个数量级？

作者: zzyhelixinxin 时间: 2015-1-30 11:06

回复 txy_love 的帖子

millpore的纯化柱浓缩病毒效果不如超速离心，前者会损失很多病毒，一致导致病毒滴度偏低。建议找其他实验室借用超速离心机进行浓缩，或许你会发现效果好很多。

作者: yuanyecat 时间: 2015-2-5 15:23

你要用用life tech的病毒包装试剂盒吧，那个效率还是不错的。

作者: daviddow 时间: 2015-5-28 10:33

提高病毒感染的效率，我觉得有一下方面：1病毒的滴度掌握好；2加入助感染试剂；3根据细胞的特点，延长感染的时间；4感染细胞的密度和生长状态

作者: iamzhangxiaoyu 时间: 2015-7-14 17:37

提高病毒滴度，或者连续多感染几次

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)