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标题: 间充质干细胞计数问题 [打印本页]

作者: sjh15123382094 时间: 2015-1-28 16:35 标题: 间充质干细胞计数问题

我们实验室都是采取的人工计数的方法，用移液管吹打混匀后，抽取少量，用平板计数法计数。细胞数多的时候还好，传代的时候细胞数比较少，显微镜下观察一个4X4小格一般10个细胞以内了。总觉得误差很大，请问有没有精确一点的计数方法？

作者: williamsunny 时间: 2015-1-28 18:59

这个是比较传统的、比较经典的、也是比较准确的方法，只是你计数的时候要加台盼蓝，只计数活细胞就好了。还有，计数的时候要快，不然细胞沉淀下来不均匀，计数就不准了

作者: gd541767393 时间: 2015-1-29 08:56

目前这是使用最多的人工操作方法，还有细胞计数仪。但是前提都是人工取出样本，所以只有操作规范点，尽量重悬均匀，减少误差

作者: 素心无痕 时间: 2015-1-29 09:46

目前所使用的人工细胞计数方法属于静态，断点观察，因其成本较低得到了广泛运用。就楼主提出的问题需要解决的是一下问题：1.你需要精确的对间充质干细胞进行计数，那么首先你要确定你手上的细胞是间充质干细胞。就原代细胞的提取，或多或少都掺杂有其他骨髓细胞；2.你需要对细胞进行增殖或药物毒性试验观察，那么推荐你可以使用爱森公司的RTCA，如果如果仅仅是为了传代，就用平板计数即可，还有精确些，可以使用手持细胞计数仪。

作者: 小小龙001 时间: 2015-1-29 09:53

人工计数时要注意染色时间，时间过长也会影响细胞活率，而且有条件的话也可以用细胞计数仪，现在我们这用的是countstar的，而且可以把人工计的数和细胞计数仪的结果综合来考虑。

作者: sjh15123382094 时间: 2015-1-29 13:23

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作者: sjh15123382094 时间: 2015-1-29 13:24

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作者: sjh15123382094 时间: 2015-1-29 13:25

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作者: sjh15123382094 时间: 2015-1-29 13:25

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作者: alicia_86 时间: 2015-1-30 10:59

细胞计数的准确率跟细胞量有关，过多和多少都影响准确率。再有就是细胞取样一定要混匀。最后取10微升打入计数板计数。

作者: dollar007 时间: 2015-2-4 15:48

手工计数方法误差很大，如果有条件的话，上仪器，比如混匀用振荡仪；取样细化操作，润湿几次、洗涤几次，吸头浸入液面多深，都规定好；计数用细胞计数仪。

作者: 莫邪小仙 时间: 2015-3-8 16:46

细胞量少时就用原液进行计数啊，所有的计数方式都在一定范围内才准确，比如我们用counstar的计数仪，原代细胞计数是不准确的，以为细胞形态不均匀，同时会参杂一些组织碎块细胞碎片等等，计数时会默认为死细胞或者细胞团等。其实人工计数是比较准确的，当然取样也得在一定范围内，量太多太少用什么方法都不会很准确的。

作者: 小猪32 时间: 2015-3-12 14:46

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计数前细胞悬液定容到1ml，取10ul直接计数；如果需要计数存活率，取样：台盼蓝=1：1即可，不过计数速度要快~可以计数两次，取平均值~

作者: showchris 时间: 2015-3-12 20:13

追求极致精确，可以上流式。。。开个玩笑

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2015-3-21 11:17

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间充质是什么类型的细胞？可以在细胞计数仪上计数么？

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-3-24 09:25

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真是快不起来

感觉每次计数要搞半个小时

作者: 倒腾细胞 时间: 2015-4-13 13:02

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定容到1ml不会太浓了么前辈多少多少孔or瓶细胞来定容

作者: avbn 时间: 2015-4-16 10:43

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这个就要增加计数的总数了，如果技术后总数小于50，误差就会很大，最好使总数控制在200左右

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