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标题: h1和h9的培养区别 [打印本页]

作者: wangxiang 时间: 2015-1-31 12:31 标题: h1和h9的培养区别

不知道大家在养什么hESC,我手里有H1和H9，但是感觉H1没有H9好样，而且这两个的最佳消化时间也不相同，不知道有没有小伙伴是养这两种细胞的，传代或是消化的时候有什么心得么？我是用EDTA消化的。

作者: hyde 时间: 2015-1-31 15:18

H1确实会容易分化一些，很多文献都使用来做分化实验，注意及时去除分化的细胞。我使用4型胶原酶消化（feeder）一个小时左右，看酶的新鲜程度。中性蛋白酶（feeder free），半个小时左右。

作者: wangxiang 时间: 2015-1-31 17:28

回复 hyde 的帖子& E( U# D2 n8 } w

恩。我们是feeder-free培养，用EDTA消化3分钟就可以了，感觉H1的克隆总是没有H9长的好，分化的话还是比较少见，就是传代后的H1总感觉形态很差。

作者: 缥飘实验员 时间: 2015-3-11 11:55

H1,难养啊，我们是feeder-free培养，用的 protocol 是 stem cell 的mTeSR1 培养基及培养手册，用dispase消化6分钟就可以了，感觉H1的克隆总是不圆滑，分化的话还是比较少见，你们做鉴定没有，我这边做了 sox2 oct4 nanog ssea4 tra-1-60 ，现在 nanog 一直是弱表达，求分享培养经验

作者: wangxiang 时间: 2015-3-11 17:14

回复缥飘实验员的帖子3 k: @ s3 N3 K. n( L7 _ ^" V$ h

H1确实比H9难养我觉得，我们用的是E8体系来培养，细胞系的畸胎瘤、核型、染色都是没有问题的，过年之后再复苏也没什么大问题，估计还是细胞系的问题吧，nanog我们1:100稀释没有问题染色，你们用mTeSR1在培养上应该扩增更快吧，毕竟有BSA。

作者: 缥飘实验员 时间: 2015-3-13 10:24

本帖最后由细胞海洋于 2015-3-16 09:52 编辑

回复 wangxiang 的帖子* L& I" `& h6 O- L

现在只做了这几个 marker 的鉴定，都有表达，核型没有做，畸胎瘤在准备，这个细胞以前用单细胞 accutase 来做老分化，现在改用 dispase 克隆团培养方法，基本上没有分化，但是克隆团的边缘不光滑，D2-D3毛刺边缘严重，D4-D5（一般四到五天传代）倒是能缩回去，那种毛刺边缘免疫荧光鉴定过，不是分化，估计就是一个扩增的特殊形态。现在很纠结这个形态，不是的是不是细胞系的问题，或者以前冻存的就有问题。图传不了，你能不能把你培养的 H1图片传二张给我。

作者: wangxiang 时间: 2015-3-17 09:13

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不知道你们其他细胞系怎么样，我们养iPS情况就很好，细胞系只要鉴定没问题，多传几代调整状态就没问题了应该，刚传或刚复苏估计都不好形态，养几天就好了，我们是0.5mMEDTA传代，复苏用的商品。

作者: 天龙八部 时间: 2015-9-22 10:58

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你好，请问你是怎么么去除分化的细胞的？

作者: 细胞海洋 时间: 2015-9-22 12:07

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作者: hyde 时间: 2015-9-23 15:23

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在显微镜下用marker笔将细胞划出来，用枪头戳掉

作者: 天龙八部 时间: 2015-12-7 17:13

回复缥飘实验员的帖子

你好，请问你是用什么方法鉴定的，荧光定量PCR吗？

作者: 天龙八部 时间: 2015-12-7 17:15

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谢谢啦！

作者: 康小纬 时间: 2015-12-29 09:53

回复缥飘实验员的帖子8 P& K/ b% i" v7 K

你好，我现在养的hES细胞也是nanog表达比较弱，而其他的几个表达还可以，同样也是用的 stem cell 的mTeSR1 培养基，你的后来又所改观了吗

作者: 细胞海洋 时间: 2015-12-29 11:44

回复康小纬的帖子
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作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-10 21:40

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就是一般的免疫荧光试验，这个表达的还是很多，这几个基因的PCR也做了， PCR 结果记得是99%。

作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-10 21:41

回复天龙八部的帖子$ i! [! }- y! a( ?, ?$ t
* G' X$ I3 q4 w2 W( O
更多的估计是细胞本身的状态，Atlas of Human Pluripotent Stem Cells in Culture，这本书可以看看

作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-10 21:51

回复康小纬的帖子 E3 ^8 l3 F0 R; C% p

更多的估计是细胞本身的状态，Atlas of Human Pluripotent Stem Cells in Culture，这本书可以看看。

作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-10 21:53

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作者: nichifanlema2 时间: 2016-1-10 22:40

回复缥飘实验员的帖子5 g5 A, f8 _3 s O

无feeder培养的ES，刚传代或者复苏的前几天，克隆多有毛刺边缘，可能跟培养条件有关，但是随着克隆的变大，边缘的毛刺逐渐消失。用条件培养基这种现象会好一些。

作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-11 15:59

回复 nichifanlema2 的帖子9 T4 e5 z) D% w. j8 {- h

是的，但是总的来说还是没有在 feeder 上圆，边缘毛刺现象一直都有，难养

作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-11 16:26

回复 nichifanlema2 的帖子
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帮我看看这几张图片，O(∩_∩)O谢谢[attach]74754[/attach][attach]74753[/attach][attach]74752[/attach][attach]74751[/attach][attach]74750[/attach]

作者: nichifanlema2 时间: 2016-1-12 09:41

回复缥飘实验员的帖子! B# K) j# c3 N; v+ p3 k0 Y

状态挺好的，放心好了

作者: nichifanlema2 时间: 2016-1-12 09:50

回复缥飘实验员的帖子! Y7 ^# X3 H' l1 L
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确实是这样的，如果密度小一些，长的时间长一些，会发现克隆比较圆，比较扁平。

作者: 缥飘实验员 时间: 2016-1-12 14:43

回复 nichifanlema2 的帖子
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谢谢，但是我们养的细胞几乎没有出现上面的图中那样，我定义为为金毛狮王样，当出现后一只养着状态没有改变，做了多能性和干性的鉴定，也都表达，但是看着也像上皮样的细胞，你能把你养的H1细胞的图片发我几张做个参考么，谢谢。

作者: liu23huan 时间: 2016-4-10 21:30

回复 wangxiang 的帖子. M1 H, A* l+ `4 N
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您好，看到您的帖子，我想请问下你们的hESC细胞株H9是从那里购买或获得的呢？我在做iPSCs鉴定，需要这个，谢谢您

作者: wangxiang 时间: 2016-7-14 09:13

回复天龙八部的帖子& Z' T" q/ K: g9 ~7 s3 ]- N
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E8体系的培养基有筛选细胞的功能吧，除干细胞以外的细胞不能生长，你的细胞要是分化有40%以上的建议就扔了吧，很难救感觉。如果是珍贵细胞，就把分化的部分刮掉，用针头等，但是应该转好的几率不大。

作者: WangYH 时间: 2017-1-8 17:18

本帖最后由细胞海洋于 2017-5-27 20:59 编辑

您好楼主，我是小研究生一枚，目前仅有的一株Hesc （h9）细胞发生了难以挽回的霉菌污染，再次购买周期太长了，可否像您讨要一株，目前还不敢告诉老板[em:9:][em:9:][em:9:]，如果可以的话请联系一下我，万分感激，谢谢楼主~

作者: 吃呆猫 时间: 2017-5-17 15:49

回复缥飘实验员的帖子

你好，请教下，我养h9到D3，D4天会飘起来，是怎么回事，用的stem cell的E8，matrigel 1:30铺板，传代加Y27634。用EDTA消化，但每次传代细胞特别难刮下来，死的还特别多，而且到了D3，D4还会飘起来，是怎么回事？

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