病毒侵染2d后：' W6 d& I, D1 v2 A$ z. I k, @8 W
[attach]67403[/attach][attach]67402[/attach]0 R0 K8 k& r# z, ]8 g j
相应的pMX-GFP对照： 6 F5 R4 W' C" Z! g- L* ~+ S9 Y% }[attach]67403[/attach][attach]67402[/attach] " C# k$ S) P, Z% \( L4 u; h病毒侵染3d后： 9 E# t7 w/ `) {6 c1 z/ E3 s3 ?[attach]67407[/attach][attach]67406[/attach]% o5 b# L& I+ H+ q6 @, I# L( D
到病毒侵染4d时，将靶细胞接种到饲养层上。/ U/ S' \: H: N" ~6 L& ~8 Y
第9天细胞形态：- I o' p- ]8 i. p
[attach]67412[/attach][attach]67411[/attach][attach]67410[/attach][attach]67409[/attach][attach]67408[/attach] ; m" s4 B( h* t2 x5 q $ J. P8 P& }- A2 p7 g8 f正常来讲，四因子诱导第9天，应该出现mES样克隆。然而我发现克隆并非长得像典型的ES样，而是呈现不规则形、不够致密、细胞核清晰可见、边缘不清晰等。 " p) B& s* y, m8 d我用的是Oct4-EGFP鼠，第九天没看到绿色荧光。2 a4 N5 c( ^% ?8 h/ {1 Z+ ?& _
分析后，发现可能有以下原因：3 h, v# Z" \+ j/ Y- S
1、病毒量还不够，细胞诱导不充分，发生不完全重编程，类似克隆形状只是因为这些细胞分裂旺盛；7 O0 ^* A! V' }4 U4 M2 b
2、LIF失效。我用的LIF在4°C存放近一年，而有些克隆在边缘才出现核质比高、折射光强的细胞，可能因为LIF失效导致； ( M: e+ L& I: y4 u3 B3、本身小鼠四因子诱导在第九天时并不能观察到典型的ES样克隆，我观察的是正常现象，只需继续培养即可。. _4 N3 G: a6 o) Q" d4 v4 s
4、其他原因。9 H7 Y; A) y6 b- {9 R
希望有相关经验的科研工作者为我解答一二，我观察的克隆形态是否正常，如果不正常，其可能的原因是什么？ ! q4 T. f3 g' M0 h. w. c$ \; U! G9 Z" q" m 补充内容 (2015-2-6 16:45):- P, C3 D0 g) n/ C* S! i* P, D
发帖时有些小错误：最后三张图中，前两张是pMX-GFP对照。最后一张是OSKM+miR-200c+miR-302诱导iPS作者: scottist 时间: 2015-2-9 14:30
回复 宋红卫song 的帖子; \2 z. z4 E( {* m- R
( k$ {7 e }0 b) H0 f, ]0 u
从形态来看，你9天诱导后的克隆是非正常的，正常情况的话，9天的克隆应该是很漂亮的圆形克隆，细胞紧密排列，遮光性强，像一个金色的圆盘，周围还可能围绕一圈分化的细胞。个人猜测是你的慢病毒感染效率较低造成的不完全重编程。请确保慢病毒的滴度和活性后，再使用。作者: saifast00 时间: 2015-2-9 15:49