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标题:
胎牛血清培养转无血清培养间充质干细胞
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作者:
莫邪小仙
时间:
2015-3-12 15:22
标题:
胎牛血清培养转无血清培养间充质干细胞
最近做有血清转无血清培养，细胞总是死掉。大家帮忙分析一下，具体操作如下：1.复苏之前冻存的有血清培养的细胞，传代培养。2.待细胞状态较好时收集细胞，用无血清培养基洗两次，再重悬接入新瓶，加入无血清培养基培养。3.但是第2天细胞就死光光了。。。
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加大接种密度也不行，另外好多人都说要进行无血清梯度培养，但是那样要经过好几次传代，能有什么办法直接从有血清培养直接转到无血清培养，并且细胞不全部死完的？
作者:
wuxiao101325
时间:
2015-3-12 16:51
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莫邪小仙
的帖子
% n0 [ k7 b6 v9 ?+ O: L/ j7 G
5 ^+ P. ~# d1 R, J) r9 B
你的无血清培养基是自己配的么？估计要么是你的培养基有问题，要么就是在转无血清培养时培养皿或瓶要预铺基质（如geltin），按我的经验，建议你转换无血清培养前先加1%胎牛血清，或者铺基质，如果不铺基质的话建议你换康宁cellbind系列的培养皿/瓶试试看。
作者:
野猪
时间:
2015-3-12 17:23
我觉得也是你培养基的问题啊，直接喂PBS都没有死得那么快啊
作者:
william
时间:
2015-3-13 09:23
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野猪
的帖子
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3 b: b1 F# v1 J! N
同意，呵呵，不过“直接喂PBS”确实太逗了
作者:
王张凡
时间:
2015-3-13 09:38
梯度培养不会要传代很多代，原代用10%，P1用5%或3%，这代之后冻存一部分，传代一部分，P2用无血清的就好了呀，才两代状态很好的。
作者:
王张凡
时间:
2015-3-13 09:38
梯度培养不会要传代很多代，原代用10%，P1用5%或3%，这代之后冻存一部分，传代一部分，P2用无血清的就好了呀，才两代状态很好的。
作者:
莫邪小仙
时间:
2015-3-13 12:45
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wuxiao101325
的帖子
# F( }% ^9 w. M A" h* x/ A6 t C
) e( t$ _! H& W2 |! t' i' N( A5 `9 M0 G
不是自己配的，是买的商品化的，里面有双抗和因子用的时候直接加进去就可以了。没有铺基质，用的nest的瓶子。
作者:
莫邪小仙
时间:
2015-3-13 12:48
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野猪
的帖子
/ l; z, d9 X& n3 B5 b3 F
- ? B( m- C9 h6 o5 _
培养基是买的，厂家说没有遇到过这种情况。。。你不知道有多惨，细胞死的我都心疼，刚养出来的就被无血清祸害死了
作者:
cloudycity
时间:
2015-3-14 00:16
试一下包被胶或是连接蛋白啥的
作者:
维维睡啦
时间:
2015-3-14 13:49
刚开始转化为无血清培养，加适量的血清替代品就可以，不过血清替代品较贵，生物活性是血清的5倍，这样在复苏培养就可以无血清培养了。如果考虑成本，可以在以后培养中逐代减少添加量就可以了。
作者:
莫邪小仙
时间:
2015-3-19 10:21
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王张凡
的帖子
; g/ k5 o, _( A! O( D) h L; I
4 L# a2 g1 x5 [+ `
从10%转到5%又转到1%，细胞还是死了。。怎么办
作者:
莫邪小仙
时间:
2015-3-19 10:22
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维维睡啦
的帖子
" z8 O+ n, w9 f7 w- `3 B9 t
7 q0 g6 A2 M" Z
是逐步减少血清量的，细胞还是耐受不住又都死了，有什么好的办法没
作者:
维维睡啦
时间:
2015-3-23 15:33
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莫邪小仙
的帖子
! v0 Q. c( o) r# b: q
3 W, I, W z* p; i' r5 j' ]
那你还是想无血清培养的，就继续使用血清替代品培养吧，我就用的这个，生物活性高。
作者:
xiongwangyj
时间:
2015-3-24 16:36
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维维睡啦
的帖子
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难道最后可以不要血清替代物了？不行吧！
7 _2 w8 q, _! M: `# M
作者:
维维睡啦
时间:
2015-3-24 16:50
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xiongwangyj
的帖子
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有可能你一直用血清培养，造成细胞已适应有血清的培养环境，在不添加血清后细胞已不能生长了。这样的话你可能要一直使用血清替代品了。要不你就还是降低浓度试试~
作者:
xiongwangyj
时间:
2015-3-25 15:15
我的意思是慢慢降低浓度到后面是不是就可以不加了呢？那就是真正无血清了吗？
作者:
791849046
时间:
2015-3-27 16:49
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野猪
的帖子
9 w2 r' H3 q" ~ O3 }
- J7 ~4 v h% f
你真逗
作者:
791849046
时间:
2015-3-27 16:51
1. 培养瓶的问题；
: k: v2 J7 G' S& K
2.培养基的问题，你是自配的还是购买的成品的，细胞放在盐水中12个小时，细胞活率都在70%以上，
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梯度培养不会要传代很多代，原代用10%，P1用5%或3%，这代之后冻存一部分，传代一部分，P2用无血清的就好了呀，才两代状态很好的。梯度培养不会要传代很多代，原代用10%，P1用5%或3%，这代之后冻存一部分，传代一部分，P2用无血清的就好了呀，才两代状态很好的。