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标题:
有关ES培养的请教大师啊
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作者:
mg1551
时间:
2015-3-17 10:18
标题:
有关ES培养的请教大师啊
为什么我养的ES总是漂啊？无论是OG2还是E14
作者:
cleargreat
时间:
2015-3-17 10:32
存在的问题可能很多。可能不是es哦，，先做个流式鉴定一下吧。或者上图。
作者:
dmz
时间:
2015-3-17 18:03
有可能是培养液的问题，可以上图看看
作者:
cloudycity
时间:
2015-3-18 10:28
1.有没有检测过支原体之类的？
/ R& U5 A3 X. K9 x) [0 I6 {( M
2.是feeder 还是 feeder-free 模式？如果是 feeder-free 2i 等小分子加了吗？我记得有一次我忘加LIF了，全飘了。还有，最好用好一点的血清···反正这些弄对了，我的e14都停不下来了~
作者:
mg1551
时间:
2015-3-23 10:50
本帖最后由 mg1551 于 2015-3-23 10:51 编辑
4 @. t; }( r: G5 L1 F" T! ?
o$ ]$ R* F( E" p, Y4 I* A
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cleargreat
的帖子
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3 ?7 C# U' p2 r7 _. S$ I3 Z0 [% J# r
作者:
mg1551
时间:
2015-3-23 10:56
本帖最后由 mg1551 于 2015-3-23 10:57 编辑
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dmz
的帖子
2 ]5 C3 ?! ^! W& f" k) L3 g: J* L$ U6 n
# i+ o9 W, n5 `0 Z$ q* `
这个是OG2的ES细胞
作者:
mg1551
时间:
2015-3-23 11:00
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cloudycity
的帖子
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/ @( F/ e: |& J6 v; y$ Q
都加了啊，师姐他们的技术好一点，但是也是有漂的
作者:
dmz
时间:
2015-3-23 17:07
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mg1551
的帖子
0 E3 X; q. f) x) p& k6 M
& B5 R4 i+ `2 V: A0 O& K7 }
细胞状态挺好的。请问您培养皿的皿底是用什么基质包被的？Gelatin，Matrigel 还是Laminin？
作者:
芦苇浅
时间:
2015-3-23 19:13
这是人的还是小鼠的ES啊，两种ES medium中添加的因子不太一样，我们使用的人的ES medium中需bFGF和LIF，而小鼠的还需要添加2i，克隆形态会更好一些。形态上看你这应该是鼠的ES吧？
作者:
mg1551
时间:
2015-3-24 09:12
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芦苇浅
的帖子
! F6 i. X% V& _1 _
4 Z1 A( m+ e: K' t7 a
恩恩是的，所有因子都加了，就是漂的厉害，重新铺gelatin，转一下盘会好一些 ，但是还是 有一小半的漂着
作者:
dmz
时间:
2015-3-24 13:44
可以尝试加点Knockout Serum试试看
作者:
芦苇浅
时间:
2015-3-25 19:19
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mg1551
的帖子
7 X' ]. K! ]( ~+ |
" ?# z1 V+ g6 R- d$ x
我们一般feeder-free 的条件使用Matrigel包被的。你说转一下板会好，说明你以前用的板子可能有问题，我们的实验中很少会出现大量的克隆无法贴壁的现象，有几个漂的也是正常现象吧
作者:
mg1551
时间:
2015-3-25 20:27
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dmz
的帖子
, x: I8 v: e9 ^+ a& _3 Q7 l
$ w/ [+ l: s3 H( @0 R. X; `
Gelatin
作者:
dmz
时间:
2015-3-28 19:46
如果贴壁效果不好，Galetin浓度可以提高到2%，或更高一些
作者:
dmz
时间:
2015-3-28 19:47
对不起，是0.2%galetin
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这个是OG2的ES细胞