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标题: 想问一下各位，DC-CIK和干细胞回输前用什么设备检测是否有细菌真菌污染 [打印本页]

作者: yuanyecat 时间: 2015-3-25 14:21 标题: 想问一下各位，DC-CIK和干细胞回输前用什么设备检测是否有细菌真菌污染

各位大牛，想问一下，DC-CIK和干细胞回输前用什么设备检测是否有细菌真菌污染？

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2015-3-25 14:40

取小样，接种于，血琼脂平板，37℃恒温培养，观察结果！

作者: leeky10 时间: 2015-3-25 16:16

本帖最后由 leeky10 于 2015-3-25 16:17 编辑 y& Q3 n; b) ~

用台盼兰来染细胞，就可以区分死细胞与活细胞（死细胞着色，活细胞不着色）。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。需要用到仪器有：普通显微镜、血球计数板、酶标仪（或分光光度计），当然也要用试剂和材料的，也可用流式细胞仪检测。. ?: m$ e6 Y" V

作者: hefan1234 时间: 2015-3-25 17:42

本帖最后由 hefan1234 于 2015-3-25 17:51 编辑
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回复 yuanyecat 的帖子3 T) s" y. n- y

检测一份细胞制剂是否合格，一般最少要测内毒素，细菌，真菌，支原体等。测细菌和真菌用滤膜法检测比较准确，但是检测时间较长，一般要两周之后出结果，整套设备的价格和每次测的费用比较高，我们实验室用的就是滤膜法检测细菌和真菌。2楼说的血琼脂测细菌，玫瑰红钠琼脂测真菌，但是灵敏度较低，真的等平板测出来长菌的话，培养液都可以看出来了。首先还是要看内毒素，第一内毒素出结果较快，半小时就够了。第二，内毒素不合格，后面就不用测了，直接废弃。第三，内毒素合格后，各项质控指标合格，细胞制剂质量指标合格，一份细胞制品才算合格。一般一份细胞制品从前期，中期，后期，最终成品最少要测4次，内毒素，细菌，真菌，支原体等只是细胞安全性检测的一部分，还不包括细胞质量检测，细胞供体检测，细胞受体检测等。当然，DC—CIK一般采集自体血液，省略供体和受体检测，但是回输前还是要检测一下病人的身体状况，看是否适合回输。

作者: ciweiyuan 时间: 2015-3-26 10:16

有现成的仪器，取样放进去就行了，临床上都是这么干的，用培养皿太慢了

作者: 小猪32 时间: 2015-3-26 10:30

回复 yuanyecat 的帖子

使用微生物培养系统（血培养仪），取样分别打入需氧、厌氧瓶中，放入血培养仪中培养即可。一般培养周期为7天，系统提示培养结果（可以打印培养曲线），若需要鉴定菌种，只需抽取瓶中样本进行相应细菌（真菌）鉴定即可~

作者: syj7888 时间: 2015-4-22 13:14

问题是不够及时

作者: wxdang 时间: 2015-4-22 13:52

这个问题好像目前是细胞应用的一个大的问题，目前快速的检测方法也有，快速检菌设备，但是快速检菌范围小，容易出现假阴性，而且方法不被法规认可，一旦出现问题，很容易造成不必要的麻烦，传统方法，也就是细菌培养系统培养，时间长，但是可靠。目前细胞公司较多，通过时间可以判断其是否标准。

作者: 三月桂花香 时间: 2015-6-16 17:25

培养冻存过程都需要做无菌检测吧，打入培养瓶，其实很快的，一般如果有菌24小时都能报警，其实如果是发细胞马上要用，只能革兰氏检测和内毒素检测了，当然内毒素不是检测无菌的~~

作者: 536536 时间: 2015-7-7 17:19

最便宜的方法:就是血平板接种，培养48小时以上，看是否长菌落。加上鲎试剂法检查细菌内毒素。活率的话，一个倒置显微镜，加上台盼蓝，计数板，盖破片，手动按压计数器，慢慢数吧。然后算出活率

作者: 536536 时间: 2015-7-7 17:20

梅里埃的微生物检测系统，就是干这个活的。

作者: zjhzxp926 时间: 2015-8-29 20:54

血培养仪和培养法检测细菌都无法在发细胞前检测出细菌，前者如果阳性最快也要几个小时，后者要几天的时间，楼上说的有道理，如果马上要用革兰氏检测和内毒素检测了。。

作者: cellcellcell 时间: 2016-5-11 14:59

被污染的话，在细胞培养瓶中就能看到，培养瓶如果发黄但透明，说明细胞活力较好，但如果培养瓶中有浑浊物，说明细胞已经被污染。

作者: cellcellcell 时间: 2016-5-11 15:00

显微镜检也能发现，显微镜像下发现有长条状物体，且不停地游动，说明已经被污染。

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