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标题: 血清在细胞培养过程中怎么使用？ [打印本页]

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2015-4-19 21:08 标题: 血清在细胞培养过程中怎么使用？

血清在细胞培养过程中怎么使用？2 k2 R/ U$ ?0 {' y _8 _5 L
在细胞培养过程中添加血清不灭活可以么？ _% M( x0 b5 t; }$ e
在细胞回输的过程时，添加的自体血清不灭活可以么？

作者: 奇幻雪蓝 时间: 2015-4-20 08:24

一、关于血清灭活
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　　1、热灭活血清的原因; ]9 L- b; `/ O9 l% X+ G( i
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　　加热可以灭活补体系统.激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞.在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清.5 K$ x) w# a  u) Z2 d7 d
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　　2、有无必要做热灭活2 x0 [. H; X# r8 P7 K

　　实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的.经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低.而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增.
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　　因此建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步.如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量!# E6 h1 X( ^8 D

　　3、怎样避免产生沉淀物

　　建议您在使用血清的时候，注意下列的操作:

　　(1)解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物:

　　(2)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生;, o- n' u) f$ W- }

　　(3)请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量;
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　　(4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤;
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　　(5)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多.7 V+ V8 F. ~1 Q
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　　二、关于血清保存冻融要点! M2 h9 q1 {4 A* X

　　1、需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱;
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　　2、4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月;* w( y/ r5 {3 a& ]2 g+ p
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　　3、由于血清结冰时体积会增加约10%，血清在冻入低温冰箱前必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂;5 u8 t) v, v+ j) n0 }
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　　4、血清一般为无菌，因此不用再过滤除菌;+ N" q7 |( a8 b7 o  N5 B/ |

　　5、如发现血清有悬浮物，可将血清加入培养液内一起过滤，不能直接过滤血清;9 \$ ]3 J5 f- i- M- Y# `6 J: ^

　　6、血清解冻时需采用逐步解冻法，从低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室温待全部溶解后再分装;+ `$ J9 q% u' V
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　　7、在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀，注意不要产生气泡，不要产生沉淀;
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　　8、不能直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大容易造成蛋白质凝集而出现沉淀;) e; y) Z0 |% ]# {5 z

　　9、血清灭活是指56℃加热 30分钟处理已完全解冻的血清，加热过程中应该摇晃均匀。使血清中的补体成分灭活;& w* y" G. Z% d' \: e

　　10、除非必须，商品化血清不需要灭活处理，热处理会造成血清沉淀物显著增多;

　　11、不能将血清在37℃放置超过2天，血清会变得浑浊，同时降解血清中的有效成分;
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　　12、血清中的沉淀絮状物主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清质量，3000rpm离心 5分钟即可去除;
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　　13、显微镜下小黑点是由于经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多，有些沉淀物在显微镜呈现为黑点，常误认为血清受污染;

　　14、通常，黑点不多时不会影响细胞生长.

作者: hsu86 时间: 2015-4-20 12:57

在细胞培养中，血清添加在培养液中用于细胞培养，浓度一般是5%
一般用于细胞培养的血清都推荐灭活，以去除补体防止细胞溶解导致培养失败! T; b# b# y1 E4 _5 K
回输不建议添加自体血清，可以用人血白蛋白替代。

作者: zhrt 时间: 2015-4-20 13:45

回复奇幻雪蓝的帖子9 K ]( A& j: @/ f- A# B' u
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细胞培养中，血清是需要灭活的，如果胎牛血清成品，你可以看一下说明书，大多数成品胎牛血清都已灭活你，如果没有或者为了更安全可以40摄氏度30min,然后离心。细胞回输过程最好不要加，长途运输的话可以加1%人血白蛋白，但是也需根据患者个人体质决定是否添加

作者: scarletkiki 时间: 2015-4-24 13:44

回复奇幻雪蓝的帖子: M3 j5 x5 C6 `7 V) z |
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在细胞培养过程中，根据细胞的不同，血清浓度可以从5-15%，一般都在10%;同时这里用的血清基本都已灭活，有的血清本身就已灭活，如果没有一般都是在56度30分钟；细胞回输的过程中一般不加自体血清，都是加1-2%的人白蛋白保护细胞，避免细胞凝集成团

作者: 大胖子阿哥 时间: 2015-4-24 21:12

回复奇幻雪蓝的帖子

其实就相当于抗原回输的时候不用加平时培养加液时候加

作者: 大胖子阿哥 时间: 2015-4-24 21:13

回复奇幻雪蓝的帖子

回输的时候加白蛋白我们用的是20%的

作者: iamzhangxiaoyu 时间: 2015-4-29 14:29

在细胞培养过程中，添加血清在培养液中是用于支持细胞培养，浓度一般是5-20%，一般用于细胞培养的血清都不灭活，灭活的目的是去除补体防止细胞溶解导致培养出问题。不建议添加自体血清，可以试试用BSA

作者: nkcell 时间: 2015-5-4 15:11

细胞培养中，血清添加在培养液中用于细胞培养，浓度一般是10%
一般用于细胞培养的血清可以不用灭活，补体在冰箱冷藏中放置3天，补体自然全部失活. A2 F0 b8 \/ l. g
回输建议添加自体血清，用人血白蛋白替代容易产生过敏反应。

作者: yuanyecat 时间: 2015-5-8 17:07

血清当然要灭活，主要是灭活补体，不然有很多问题会发生。现在也有很多无血清培养基，我推荐你使用

作者: Sarge 时间: 2015-9-7 14:35

血清在细胞培养过程中主要作用滋养细胞，使细胞适应体外培养环境，快速增殖。细胞培养过程中添加的成品血清一般是胎牛血清，这个已经灭活直接添加就可以，胎牛血清添加一般是5%或者10%，过量的胎牛血清容易导致细胞过营养化，过早分化。细胞回输时，建议添加人血白蛋白，我这参考浓度是5%，使用自体血清的话必须灭活，将可能存在的风险降到最低。

作者: 小刘 时间: 2015-9-7 16:22

有的人用胎牛血清，如果用自体血浆的话必须灭活，否则会影响后期培养

作者: 小刘 时间: 2015-9-25 15:06

正对你的三个问题按个回答：1.血清在细胞培养的3,4，5，7天使用，一般按百分之2的比例添加；3,4天的添加量根据种瓶体积，我们加2-3mll；2.不灭活不可以，要灭活补体等影响细胞生长的杂质，还要离心析出纤维蛋白原；3.细胞都培养好了，你回输时加个什么血清，血清的作用是促进增殖啊，望采纳。

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