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标题: CIK培养如何快速增殖 [打印本页]

作者: h951595223 时间: 2015-5-18 09:37 标题: CIK培养如何快速增殖

CIK细胞培养，我们实验室是做自体CIK细胞培养，由于血都是来自肿瘤病人，个体差异比较大，细胞的增殖速度都不一样，隔一天增殖50%-100%之间，当遇到增殖在50%的时候会非常麻烦，培养的周期很长，患者各种不满，在这想问问大神们，如何增加增值的速度，加什么因子，怎么加，操作流程是什么，我们实验室流程为：分离淋巴细胞，10的六次方密度接种，当天加入r干扰素，第二天加入CD3100ng/ml和白介素21000U/ml,之后隔一天补一次液，一直到量够。

作者: alicia_86 时间: 2015-5-18 10:59

cd3的浓度有点低吧？还有提前24h包被一下瓶子

作者: chenlin080102 时间: 2015-5-18 11:24

因子浓度上没太大问题，最好是控制好培养密度，不要一味的补液，越是长得慢越是要控制好密度，不知道使用的是什么品牌的CD3，有可能是细胞没有被活化。

作者: 大少爷 时间: 2015-5-18 12:15

这种传统工艺就是这样的，细胞增殖速度和细胞量都不理想，要想获得高的细胞增殖速度和大的细胞量必须更换培养工艺，探寻更好的培养方法。

作者: hwlightning 时间: 2015-5-18 15:20

你可以试试加入CD28，还可以加IL-1a，而且加入CD3和IL-2后培养基颜色没变黄不用补加培养基。

作者: yanglixia1984 时间: 2015-5-21 17:03

你补液补的太频繁了还容易污染

作者: chenguangyu 时间: 2015-5-22 10:28

可以一次性多补点，比如5倍补

作者: momoenn 时间: 2015-5-26 15:34

因子加这个浓度，挺高了。可以试试吧接种密度调到1.5X10^6. 再不行的话，试试加自体血浆，血浆要提前灭活

作者: kiss2346 时间: 2015-5-27 14:45

以前遇到过这种情况，自体培养没问题脐血CIK 生长不好。后来我们换了个培养体系。。。。

作者: cheeray 时间: 2015-6-2 14:30

补液要看增值的状况来，隔一天补液。不行的。。一般4-5天增值最快了。。前期没必要补液的啊。。

作者: caustic 时间: 2015-6-5 09:34

1.细胞密度偏低了，可以稍微提高细胞接种密度，我们实验室是按2-3*106 密度接种，你可以试试。 L; ~+ d- @- X$ `
2.可以试着加入5%的自体血清培养，血清需要灭活，灭活方法：将分离的血清放入56℃的水浴锅30min。
3.还有就是换液频率，换液一定要根据细胞生长情况，如果细胞还没有增殖到喝死数量，你就加液，会导致细胞密度过低，生长缓慢。

作者: 小跑 时间: 2015-6-8 16:10

回复 kiss2346 的帖子, |$ V3 M+ }- ]2 h; J
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我目前也遇到你说的这种问题，能否请教一下怎么改进？

作者: hyg5481655 时间: 2015-6-9 16:18

回复 h951595223 的帖子
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请教培养CIK时，CD3单抗只加一次还是全程都加？

作者: alicia_86 时间: 2015-6-10 08:47

第二天加点自体血浆。。白介素2的浓度可以再大一点

作者: nailute1985 时间: 2015-6-10 08:55

一般来说可以3天补一次液，另外你的接种密度可以调整到2*10^6，适当隔一天补加点白介2效果会好点。

作者: teahouse0802 时间: 2015-6-10 10:04

我想问一下，我原来的实验室接种密度都是在1*10^7，这个算是正常的吗？细胞复苏的方案是2*10^6.

作者: 蜗牛爱贝贝 时间: 2015-6-10 19:19

加完因子后，不要急于补液，要根据培养基颜色的改变在补液，如果患者本身白细胞少，培养基还是红色时，你补液反而吧细胞密度变得更低了，更不利于细胞生长，还有不要每天补液，隔天或者隔2天，补液可以3-5倍的补加培养基

作者: 细胞海洋 时间: 2015-6-11 08:15

回复 teahouse0802 的帖子
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作者: fenlichong 时间: 2015-6-11 10:04

个人建议：培养周期一般两周左右，期间加入自体灭活血浆，细胞因子还需添加IL-1α，补液是细胞悬液发黄时再补，时间灵活。

作者: 老姜 时间: 2015-6-23 11:08

给患者回输的细胞不主张向研究一样加各种因子对细胞进行刺激。这样的操作先要考虑添液环节：添液一定是在对光看培养液中有大量的颗粒（即，细胞增殖形成细胞球）才能添液。添液时将细胞球轻轻吹散，添液量一般不超过原液的1倍。这样可使细胞在培养液中保持一定的浓度，才能增殖更佳。细胞浓度太低细胞是无法到期增殖到所需数量的。

作者: bukuro 时间: 2015-6-23 19:09

本帖最后由细胞海洋于 2015-6-23 20:29 编辑 : ?, N5 X& ^+ F# |! u, G& D- h0 Z
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最简单的方法是换培养基，最麻烦的方法是自己去试验各个组分。

作者: long3390hai 时间: 2015-6-25 14:50

补液要看细胞密度，维持在1.0E+06/ML左右，还要看细胞的状态，有一些细胞增殖能力很低，那就无能为力了。( I3 Y2 C: v8 l- S: B' ~6 g$ \5 R

作者: cheeray 时间: 2015-7-13 11:20

初期提高密度。。等大量增值后在补液。。

作者: 312473313 时间: 2015-12-16 15:44

我们一般是用CD3和IL-1a包被，IL-2直接加培养基里，第一天就加IFN-y了，细胞种瓶密度一般都大于2X10^6，后面不也根据细胞生长状况以及培养瓶中培养基颜色变化才补，可以参考下

作者: 御剑红尘 时间: 2015-12-17 10:16

细胞在分离出来的前几天别动，静置培养就可以，然后低速离心一次，细胞就会长得比较快。这是我们这里的流程。

作者: chslyx 时间: 2015-12-17 14:35

加点灭活的自体血清，还要看看你的因子是哪里的，厂家不一样效果差很远的

作者: 315997864 时间: 2016-4-21 10:10

1，可以试试提前包被用剂量的CD28一起进行包被。2。分血时血浆留着灭活后按10%比例添加。3。前面补液可以一天一补，后面看细胞密度最好调整到2天补一次。

作者: Natalie 时间: 2016-4-22 10:34

要看情况补液，不能每一次都是隔一天补液，或者第二天适当补加点因子

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