干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 神经干细胞传代 [打印本页]

作者: clujyh430 时间: 2015-6-1 18:24 标题: 神经干细胞传代

提取新生鼠海马神经干细胞，传代两天后，发现有细胞贴壁分化，我的传代方法是用1毫升Accutase（sigma）37度消化10分钟后用200ul的枪头吹打70次左右，在消化的第五分钟是用200ul的枪头吹打30次左右，然后再继续消化，消化后的细胞悬液中发现仍然有未消化的神经球，我的培养基是DF12，EGF,bFGF,BSA,肝素钠，谷氨酰胺，葡萄糖，B27 L$ b" P5 Z: N% l, k, R9 l' M/ ?/ o9 q
大家看能做哪些改进，能保证细胞活力，又能消化彻底？

作者: suning5 时间: 2015-6-2 15:04

用机械吹打法，不要用酶消化。

作者: clujyh430 时间: 2015-6-3 23:40

机械吹打很难将所有神经球消化成单细胞悬液，起不到传代的作用，神经干细胞会越来越少

作者: fm100200 时间: 2015-6-4 11:04

我们培养的总是被污染为什么，还有如何传代呢

作者: NANCYWHN 时间: 2015-6-4 14:13

机械吹打粗暴会对细胞产生损伤，而且不能保证完全悬浮。

作者: clujyh430 时间: 2015-6-4 21:13

有人用过加拿大Stem cell公司的NeuroCult™ Chemical Dissociation Kit (Mouse)，效果怎么样？

作者: 蜗牛爱贝贝 时间: 2015-6-10 18:57

个人感觉，如果极少部分细胞不掉，那就算了，不要太过于纠结那些绝少的部分，有可能那些细胞本身就不是需要的细胞，即使时，他不掉也同样说明，他改变了

作者: 细胞海洋 时间: 2015-6-11 08:07

回复 clujyh430 的帖子

建议你发新帖提问

作者: sunyandong 时间: 2015-8-13 10:45

学习

作者: Tim 时间: 2015-12-25 05:44

回复 clujyh430 的帖子# `! V4 M+ R% [4 \3 S+ ?7 @8 S

1：枪头吹打次数太多。建议分次吹打。; g, N4 V- B. x0 r8 A: a
2：消化时间比较长。吹打和消化结合。
3：你的培养基是用的什么？

作者: 刁萍 时间: 2015-12-30 08:50

回复 clujyh430 的帖子$ X3 u6 g# f; K9 w& m: a

神经球过大可用200ul抢头反复吹打使之变成单细胞悬液，我一般吹打120-150次左右。

作者: jinyiran 时间: 2016-3-2 23:36

回复 clujyh430 的帖子$ T: b% ?' S( n1 e) c/ M! `% l
1 C4 x. ^: O, V" \7 ?2 n
效果感觉一般，不知道是不是我的操作问题。但是完全是按照说明书上来的。消化结束后仍然很多神经球

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)