干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
转染基础知识手册——Life Tech出品
[打印本页]
作者:
dahui
时间:
2015-7-9 09:28
标题:
转染基础知识手册——Life Tech出品
目 录
; I8 r, V" R T4 t& P/ ]5 T
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
3 {, ^7 f6 u% L4 h2 i
1. 简介 . . 1
0 z: F3 |, }4 f( H% ~/ B7 B F+ |" e6 r
2. 转染基础知识 . . 2
/ \! e" | i3 i5 i
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
( I2 _- q" X7 B
什么是转染 2
0 h' h! ^' b" i z
术语 2
" H9 @4 L8 h- o: h
应用 3
" c2 d, q8 e' k
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
; y$ ^+ N0 w9 I8 R; k5 G4 w4 j
瞬时转染 4
1 T& |; b+ { Q: h
稳定转染 4
, w8 w3 d# j% g/ \+ G
选择转染策略 . 5
+ y: Q- S$ J' p" }5 U
基因输送技术 . . 7
; G( P' H3 P! K' |/ ]! N* w+ f) t
阳离子脂质体介导的输送 9
K# Z- b0 ~$ k+ |5 A
磷酸钙共沉淀 10
: v9 b" Q& |' T! \1 T
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
. L& f# H( A$ G6 c9 \
其他阳离子聚合物输送 . 12
; K5 X$ \6 e9 c2 i
病毒输送 13
1 Y* H6 |, X% U* d: ^
电穿孔 . 14
7 c( h/ K# A5 U3 E8 @+ U9 a% Y6 g, X2 M
其它物理输送方法 . 15
* T Z& g5 ~6 w" X! y" ^4 ^
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
2 j) Y" Q1 Y) @4 B. P* V4 X5 p
机理 16
9 _* e1 C% L8 G3 r; \2 k
阳离子脂质体转染试剂 . 17
2 g! \" y9 X# U7 |# z/ J
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
) H! O' @3 M5 e# q' S
病毒载体的主要特点 . 19
. @, x; R/ ~& h3 u4 I7 V
常用病毒载体 19
$ }" @$ X4 U# B& R; j* i
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
( e# u; a( q# p
稳定转染子的选择 . . 23
$ X2 G- N# K4 w9 K; v; L
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
w/ ~3 B0 O/ g3 X! m
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
) U" j% c1 Y: I! J
转染分析 24
7 Y8 n. ?1 h) I, n" v8 A
基因调控分析 25
# j! }9 f1 o1 y. w7 z' [
常用的报告基因 25
* g& j* |9 ~( O) n
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
+ _/ ]1 a: @) `, X0 n
常用RNAi术语表 . 26
9 ^9 c8 @, ]0 M- C* I# g
RNAi工作原理 . 27
* R% z* f" A& z/ Y
siRNA分析 . 27
! j( U3 Z" P; L8 x1 [1 ]
miRNA分析 28
2 F( t0 s6 N6 N+ A4 n" Z
选择RNAi方法 . 29
4 {9 w4 O" K- g3 u8 M2 s
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
1 s& V0 w% E/ R, d3 E# S
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
$ V7 D) X) U5 n0 F( a7 R
细胞类型 30
* N3 e! ]# }/ N4 g2 h }
细胞健康与活性 31
, B( Z+ F" e [7 f d( x7 Q2 R
汇合 . 32
3 g1 G; F4 b; l
培养基 . 32
/ v+ y- v) T: J3 o Z/ F
血清 . 32
. }( h, ~7 S7 c: V$ { o
抗生素 33
+ Q+ e P8 h9 d3 ?; |6 M
转染分子的类型 33
4 s; P. H9 G9 a2 Q G, X
转染方法 33
3 B: r4 R2 F/ G: g
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
9 A' w6 }2 f' N7 ]" d* o3 z/ z5 t
连续细胞系 . 34
4 V/ D! n9 Y& K g
原代细胞和有限培养物 . 35
2 _1 J& {. f2 y! a
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
C" Q; x- ]) H" Q
哺乳动物细胞表达系统 . 36
3 h ^/ z, T' E2 n. U, R; x
昆虫细胞表达系统 . 37
- ]- p4 `! p* K! U1 `! j# G" t
质粒DNA转染指导原则 . . 38
/ f, N0 E8 b+ V
载体考虑因素 38
6 l% C- z; v2 n, o/ }% K
质粒DNA的质量 38
; M5 i* A/ w$ E" u" \" X. U
基因产物和启动子 . 39
1 s3 g9 V+ S, g1 w. Q
对照 39
* i: U# M( R0 U" E/ k- a8 q3 U, ~
质粒DNA转染的优化 . . 39
2 P9 ?9 ^* \( @2 ?# T
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
F( m5 f T& c6 M8 `
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
- B A$ q$ d9 @% m1 g
电穿孔的考虑因素 . 43
1 n6 }# O3 [7 ]# n1 ?) A4 m5 `
稳定转染子的选择 . . 44
9 [2 i k6 c& U1 N8 W
开始前 44
' B. O) `3 A6 B- m5 c! c, p% M
杀死曲线 44
6 z/ I$ Q6 p' b( |
选择工作流程 44
, P( K( m: H* M5 ]6 n3 Y4 ~5 ]
选择RNAi策略 . . 46
3 \. H- c8 G* X* Z
siRNA与载体方法 46
+ I V/ Y/ H3 y3 _
非载体siRNA技术 47
2 _' o" j0 N$ ~, k- @) X
siRNA转染 . 49
0 v& y* p l: x# Y6 O* ?
载体介导的RNAi . 50
# U' v5 l8 Z5 B* E" {$ u7 j7 k# [
RNA转染指导原则 . . 51
3 x9 M3 z9 g0 W7 r- M5 j3 w. V6 r3 Y
RNAi工作流程 . 51
( N" O! } H8 P& f
RNA处理 52
7 p) r5 f! x2 N8 f
转染效率 52
( z- ?( p& i# X9 z$ Y, @3 W \
阳性对照 . 52
) }( k+ o+ X% `( K7 X7 [# A
阴性对照 52
9 Y4 `. C0 L% z" P4 A
共转染 53
4 m7 a5 N% U0 r+ X% @& g
siRNA质量 . 53
' y% |$ j% u7 p0 Q4 \
siRNA用量 . 54
! s: `/ N" f! M: I4 E
转染试剂的体积 54
3 z8 q, B+ W" Z0 F- [9 o
细胞密度 54
4 g- y# A& J9 g) T* }( x
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
& S) X& p9 d$ b3 ]) T9 }' k: L
转染过程中存在血清 . 55
* ~4 s" W7 f7 j! F$ r$ Q
siRNA实验成功的技巧 55
' n+ |/ @8 \( P; x1 P& F1 x
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
- H, p+ l _7 R" u3 k! h
影响siRNA效率的因素 56
- x: q/ ]1 ?" \, ~' d
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
( e6 A7 V {. _
转染产品列表 . . 57
* h( u W% L5 k0 V \2 E' \
转染试剂 57
& A; Q1 r) i8 T
Neon®转染系统 . 58
. T' U2 i5 M1 |+ J# j. |
RNA干扰 58
: j: G2 y% D* h
参考文献 . . . 59
& ^ G2 @8 S: }0 x
附件:
transfection-handbook-cn.pdf
(2015-7-10 11:57, 2.56 MB) / 下载次数 130
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NzA1NjV8YzY3OGMzMDF8MTc5MTY5MDY1NHww
作者:
chenlin080102
时间:
2015-7-9 09:42
谢谢
作者:
天使心3420
时间:
2015-7-9 17:17
非常感谢
作者:
Ernest
时间:
2015-7-10 12:28
谢谢分享！
作者:
daviddow
时间:
2015-7-10 13:02
谢谢
作者:
chuanbaozang
时间:
2015-7-10 14:07
很好的资料，收藏之
作者:
xnyyswzl
时间:
2015-7-10 14:15
作者:
englishjane
时间:
2015-7-12 08:50
谢谢
作者:
强威
时间:
2015-7-12 11:33
多谢了
作者:
强威
时间:
2015-7-12 11:33
多谢了
作者:
cyz3057
时间:
2015-7-12 13:14
作者:
treestem
时间:
2015-7-12 13:15
谢谢
作者:
miliang915
时间:
2015-7-12 16:00
谢谢分享
作者:
miliang915
时间:
2015-7-12 16:01
谢谢分享
作者:
kopmsc
时间:
2015-7-13 14:11
谢谢楼主分享
作者:
avbn
时间:
2015-7-14 11:57
好东东
作者:
蓝枫麦麦
时间:
2015-7-14 15:41
看看
作者:
yinchong42
时间:
2015-7-14 16:08
不错
作者:
louistep
时间:
2015-7-14 17:07
求全文
作者:
iamzhangxiaoyu
时间:
2015-7-14 17:31
作者:
cell1314
时间:
2015-7-14 20:46
看看
作者:
Damon-Salvatore
时间:
2015-7-15 11:17
thanks for sharing
作者:
huperghost
时间:
2015-7-21 15:07
谢谢
作者:
Jiangshi90
时间:
2015-7-21 21:35
太赞了，近期会做转染~谢谢楼主
作者:
tijfk
时间:
2015-7-24 09:10
学习学习
作者:
yztell2013
时间:
2015-7-24 09:39
谢谢
作者:
chenzhengliang
时间:
2015-7-24 16:00
学习
作者:
snowny007
时间:
2015-7-27 11:21
学习
作者:
MyGirl
时间:
2015-7-28 08:31
谢谢分享
作者:
小豆芽
时间:
2015-7-28 09:49
谢谢
作者:
xiaoxiaodeji
时间:
2015-7-30 17:18
好东西，学习学习
作者:
c15733183
时间:
2015-7-30 18:44
谢谢分享
8 b H" W1 \7 h: e6 t9 r5 a [/ [
作者:
biowish-yuan
时间:
2015-7-31 10:14
谢谢！
作者:
tangstemcell
时间:
2015-7-31 10:47
有用
H9 x& J. h) M6 S
作者:
grupty
时间:
2015-7-31 10:50
Thanks
% s* R* q8 M( p+ C0 T/ K$ h$ A8 [. k
作者:
tangstemcell
时间:
2015-7-31 11:10
为什么下不了
作者:
javadig
时间:
2015-8-3 17:44
能下载吗？
作者:
edwardellen
时间:
2015-9-30 20:19
看着很好
作者:
swtarron
时间:
2015-10-12 09:48
不错的资料
作者:
kirkland
时间:
2015-10-13 03:08
谢谢楼主@
作者:
lt19850428
时间:
2016-1-23 00:28
学习
3 L8 V0 a( F, n! }; W5 I( h1 C: `- \
作者:
nailute1985
时间:
2016-1-23 00:37
看看
) T9 a! Q# s z/ r6 g
作者:
haibara007007
时间:
2016-1-26 15:47
学习一下
作者:
hhqzoe
时间:
2016-1-28 16:27
谢谢
作者:
15063363804
时间:
2016-2-16 09:42
看看
作者:
wf78365421
时间:
2016-2-16 16:40
gggggggggggggggggg
作者:
fengmengujing
时间:
2016-2-23 17:48
谢谢分享~
作者:
zuming
时间:
2016-2-24 13:32
学习
作者:
小白yzq
时间:
2016-3-9 10:49
想看
作者:
小白yzq
时间:
2016-3-9 10:50
没有免费观看的吗
作者:
ppcl2
时间:
2016-3-9 11:04
转染选择指南和转染决策
作者:
bio-bin
时间:
2016-3-9 11:19
看看，学习！
作者:
iytbxxg
时间:
2016-3-10 14:24
LOOK
9 Z# |+ T3 ^0 c9 [
作者:
小白与大黑
时间:
2016-3-10 22:31
马上要学习转染了 谢谢楼主的资料
作者:
duwenjing
时间:
2016-3-23 13:56
谢谢
作者:
lccsiais
时间:
2016-3-24 09:49
谢谢分享
, I) E3 W, O8 x
作者:
riverdtang
时间:
2016-3-24 14:42
作者:
alpha920
时间:
2016-3-27 11:09
学习一下
作者:
Diane0321
时间:
2016-3-28 08:59
谢谢
作者:
maokai345
时间:
2016-4-4 11:33
来看一看
作者:
限弓5829
时间:
2016-4-6 23:04
学习下
作者:
wuhuaguo88l
时间:
2016-4-7 06:03
作者:
rope
时间:
2016-8-24 11:29
试下新手能下不
作者:
蜡笔71
时间:
2016-9-8 13:01
1....
作者:
chang-514
时间:
2016-9-14 16:08
看看
作者:
wangxiang
时间:
2016-9-17 21:17
谢谢
作者:
Quiet
时间:
2016-9-22 08:56
学习
作者:
nichifanlema2
时间:
2016-9-22 09:01
xiexie
作者:
xiepu1
时间:
2016-9-26 09:12
又下不了的文献
作者:
zhengjianwei521
时间:
2016-9-28 11:52
1212121212112
作者:
veda327
时间:
2016-10-14 11:48
kankan ruhe !
作者:
niliu730323143
时间:
2016-11-16 08:55
好东西
作者:
strainf
时间:
2016-12-12 14:43
( J8 S. G. P4 G7 P
非常感谢
作者:
田甜
时间:
2017-1-17 09:07
看看
作者:
Albertchen
时间:
2017-1-17 15:31
谢谢分享
作者:
ljl1988115
时间:
2017-2-28 11:36
xzxxxx
作者:
秋水度
时间:
2017-4-19 11:18
借鉴一下！！！！！！！！！！！！！！！！！！
作者:
alicia_86
时间:
2017-4-19 14:30
kankan
作者:
ltickp
时间:
2017-4-20 08:57
看看
作者:
tingwuyu
时间:
2017-7-20 15:31
谢谢
作者:
hengton
时间:
2017-7-30 15:30
学习一下
作者:
mingge1987
时间:
2017-8-2 16:07
学习
作者:
wca66
时间:
2017-8-18 13:20
xiexie
作者:
wca66
时间:
2017-8-18 13:27
作者:
毛球
时间:
2017-8-18 13:48
谢谢
作者:
crazyspy
时间:
2017-8-23 10:45
睇下咩来的
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5
附件: transfection-handbook-cn.pdf (2015-7-10 11:57, 2.56 MB) / 下载次数 130
学习下