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标题:
转染基础知识手册——Life Tech出品
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作者:
dahui
时间:
2015-7-9 09:28
标题:
转染基础知识手册——Life Tech出品
目 录
* q( m d/ q) x
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
* U5 ~- W$ J0 m* W6 G8 |% }! O% I
1. 简介 . . 1
9 M7 H6 l5 K. r2 Z: A9 f6 i1 j" g; Z% s
2. 转染基础知识 . . 2
; X& g _: \# R l
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
& J& r2 e: B1 e
什么是转染 2
3 t, H, n" k! |+ K- \6 {$ {7 j
术语 2
0 ~ y# X" [; m9 ?" Q G4 ]
应用 3
' v* m1 O* h4 \. c
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
% g0 X6 x7 w5 s; P( Q+ a2 z+ q
瞬时转染 4
" A) I6 @/ e3 ~! ?
稳定转染 4
% I0 ~ m. b* h, r9 W
选择转染策略 . 5
4 q1 N7 z2 d9 b( n3 H. O+ w- f# D' y
基因输送技术 . . 7
& w/ q3 W Y) p! |" C" m! w
阳离子脂质体介导的输送 9
D6 H4 R) i# N3 N/ f4 U6 u
磷酸钙共沉淀 10
- m' j7 p( E* }5 O% e
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
! {. ~# z* j. A; ~+ [
其他阳离子聚合物输送 . 12
, N2 O1 ]7 `' s0 P! O
病毒输送 13
- A8 z; Q- q/ m9 V
电穿孔 . 14
; r- V; ]) w1 `$ [. `
其它物理输送方法 . 15
* H8 L! O# b' N& a6 N
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
7 W7 a; v; b; i, y" t/ p9 w* A
机理 16
5 n/ q# V1 b6 u+ r- Y5 x! ?
阳离子脂质体转染试剂 . 17
5 Y' P' [" R2 g+ t
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
* w3 ]! U! ~% J4 P; G7 B* @4 p6 C
病毒载体的主要特点 . 19
4 e ?% `( v) D$ G
常用病毒载体 19
% R8 M5 z- u! z% {6 P
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
, j) a% l2 ]' P# F9 A' K9 y( r
稳定转染子的选择 . . 23
# d) c3 q& t# T1 e& r
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
8 l7 U+ h" V ?" G5 ^$ s! I4 m
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
7 }9 k- x2 t$ a) U
转染分析 24
1 [) R3 F, E) W* z
基因调控分析 25
, q) g5 ]: @) T6 p l; Q3 U$ \$ g
常用的报告基因 25
4 E4 o8 h" r5 a5 k
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
2 w- z9 ~1 L* G9 _5 ~/ N$ X
常用RNAi术语表 . 26
4 G( y# P; U. _2 h3 d [
RNAi工作原理 . 27
1 R$ Y# P# l$ a; y5 g+ v
siRNA分析 . 27
, n: O$ }; k7 K3 }( _
miRNA分析 28
0 S5 P1 e) f; y, D/ B$ ^
选择RNAi方法 . 29
8 ~2 c9 F- H2 ?' n
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
, W1 r6 p a: M4 ]: k9 E
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
6 q. d, | ]/ E1 l. ^" K3 N' u
细胞类型 30
' e) m; Z1 M: _& A
细胞健康与活性 31
% G8 ?% ?- `# r2 U' t# z" y
汇合 . 32
. J% z+ [# b8 M/ ?
培养基 . 32
' w( u9 D/ S/ z# b, q
血清 . 32
/ n G/ l* Y9 |( \7 q% [+ y
抗生素 33
2 w9 Q ~5 r0 U6 D1 n" l+ X
转染分子的类型 33
# i6 C. s, h* l! }! |8 x6 I1 w
转染方法 33
' d" ?8 v- p2 E
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
c' R4 R& A6 I# w" h
连续细胞系 . 34
; K9 ?- f4 |. ~7 j& y/ g
原代细胞和有限培养物 . 35
* d$ ^6 X& {! U* v! ]7 p5 Q- j) h
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
# a6 ?, [4 g b- C6 L O
哺乳动物细胞表达系统 . 36
5 o% N9 W o1 @" C, D2 B3 C
昆虫细胞表达系统 . 37
1 N6 @. H1 t. v, ]1 Z9 b0 m$ l
质粒DNA转染指导原则 . . 38
( j6 g U- Y+ G. s0 S4 v" L2 j# g+ Y
载体考虑因素 38
2 A% y6 u5 |* g: f1 ?* ^
质粒DNA的质量 38
! _. O) M8 T9 w4 e( H
基因产物和启动子 . 39
+ j1 R& h) j1 z$ _
对照 39
9 d, X' ^, I, y8 }' L% A$ L- x
质粒DNA转染的优化 . . 39
9 \# | ]3 C' D9 h& v t. F1 t
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
# U- w8 b# c0 n9 F+ }
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
2 Z4 A2 x5 x9 T% b2 Y+ z/ p( {
电穿孔的考虑因素 . 43
/ k% W: o1 G2 D5 S% d3 l) |5 w% T
稳定转染子的选择 . . 44
8 [! g2 m0 W, e! `6 d' M/ \+ [6 R! ^
开始前 44
+ u6 a# p8 h- L0 W
杀死曲线 44
( P; N& L" c! K, y7 e" H0 M8 w
选择工作流程 44
4 Q2 a7 x0 @3 H- r0 \( c+ ~7 _. w
选择RNAi策略 . . 46
/ I' C* [0 L: d& R1 d/ P; v; O- s
siRNA与载体方法 46
0 |/ R/ h& t2 r- X" }+ I
非载体siRNA技术 47
; C2 w( j5 Z3 o" J! y5 ^
siRNA转染 . 49
4 n8 I B7 w9 K3 T9 T
载体介导的RNAi . 50
( U, i! X8 K, |9 V+ I3 M, f% m
RNA转染指导原则 . . 51
E, `& \7 a) T6 w6 h3 k4 [0 B
RNAi工作流程 . 51
. F; _ q$ R2 h2 P7 m
RNA处理 52
' G, l; j5 R0 _. L8 h
转染效率 52
. J# c/ { j0 n l
阳性对照 . 52
; ]# o3 B) E; Q: B% G) r/ y
阴性对照 52
3 a9 {. x7 G; p
共转染 53
1 y n: y; Y2 P# A" o1 [
siRNA质量 . 53
7 |" X; g9 E( b! b- E
siRNA用量 . 54
) o# C7 K4 ^6 S1 _
转染试剂的体积 54
2 f7 Z# R$ w1 u9 }6 h: d# }: ^
细胞密度 54
! H3 j% J! `, j0 s7 b6 [- Q
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
4 x/ V C* _* ~- \% R2 m
转染过程中存在血清 . 55
3 V" C1 ^* H+ l1 h1 |7 g
siRNA实验成功的技巧 55
! i$ Z. O) B4 [& b; K$ z
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
2 l, A4 `9 L! ^& g
影响siRNA效率的因素 56
& G; @! D5 B+ R' S
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
4 C4 [4 ?, l. G4 C& j
转染产品列表 . . 57
# x `/ o6 s9 G0 ]
转染试剂 57
+ ?/ ]2 H8 V4 W( P! e2 M
Neon®转染系统 . 58
! R: s; m* R4 \
RNA干扰 58
. c( Z$ d, t6 ~+ q2 C, F# c; R
参考文献 . . . 59
- k3 l; q7 @( r7 H g* A' _
附件:
transfection-handbook-cn.pdf
(2015-7-10 11:57, 2.56 MB) / 下载次数 130
http://www.stemcell8.cn/forum.php?mod=attachment&aid=NzA1NjV8OTRlMDI0Y2R8MTc0OTE0MzEyM3ww
作者:
chenlin080102
时间:
2015-7-9 09:42
谢谢
作者:
天使心3420
时间:
2015-7-9 17:17
非常感谢
作者:
Ernest
时间:
2015-7-10 12:28
谢谢分享！
作者:
daviddow
时间:
2015-7-10 13:02
谢谢
作者:
chuanbaozang
时间:
2015-7-10 14:07
很好的资料，收藏之
作者:
xnyyswzl
时间:
2015-7-10 14:15
作者:
englishjane
时间:
2015-7-12 08:50
谢谢
作者:
强威
时间:
2015-7-12 11:33
多谢了
作者:
强威
时间:
2015-7-12 11:33
多谢了
作者:
cyz3057
时间:
2015-7-12 13:14
作者:
treestem
时间:
2015-7-12 13:15
谢谢
作者:
miliang915
时间:
2015-7-12 16:00
谢谢分享
作者:
miliang915
时间:
2015-7-12 16:01
谢谢分享
作者:
kopmsc
时间:
2015-7-13 14:11
谢谢楼主分享
作者:
avbn
时间:
2015-7-14 11:57
好东东
作者:
蓝枫麦麦
时间:
2015-7-14 15:41
看看
作者:
yinchong42
时间:
2015-7-14 16:08
不错
作者:
louistep
时间:
2015-7-14 17:07
求全文
作者:
iamzhangxiaoyu
时间:
2015-7-14 17:31
作者:
cell1314
时间:
2015-7-14 20:46
看看
作者:
Damon-Salvatore
时间:
2015-7-15 11:17
thanks for sharing
作者:
huperghost
时间:
2015-7-21 15:07
谢谢
作者:
Jiangshi90
时间:
2015-7-21 21:35
太赞了，近期会做转染~谢谢楼主
作者:
tijfk
时间:
2015-7-24 09:10
学习学习
作者:
yztell2013
时间:
2015-7-24 09:39
谢谢
作者:
chenzhengliang
时间:
2015-7-24 16:00
学习
作者:
snowny007
时间:
2015-7-27 11:21
学习
作者:
MyGirl
时间:
2015-7-28 08:31
谢谢分享
作者:
小豆芽
时间:
2015-7-28 09:49
谢谢
作者:
xiaoxiaodeji
时间:
2015-7-30 17:18
好东西，学习学习
作者:
c15733183
时间:
2015-7-30 18:44
谢谢分享
5 N; A z6 k2 m
作者:
biowish-yuan
时间:
2015-7-31 10:14
谢谢！
作者:
tangstemcell
时间:
2015-7-31 10:47
有用
# J0 K. h- m [- ?# }% Z" ~
作者:
grupty
时间:
2015-7-31 10:50
Thanks
6 V+ x7 Y/ [8 o; a% V5 g6 h
作者:
tangstemcell
时间:
2015-7-31 11:10
为什么下不了
作者:
javadig
时间:
2015-8-3 17:44
能下载吗？
作者:
edwardellen
时间:
2015-9-30 20:19
看着很好
作者:
swtarron
时间:
2015-10-12 09:48
不错的资料
作者:
kirkland
时间:
2015-10-13 03:08
谢谢楼主@
作者:
lt19850428
时间:
2016-1-23 00:28
学习
) E T& u# Y# x. z
作者:
nailute1985
时间:
2016-1-23 00:37
看看
" u- D; `0 q% A D
作者:
haibara007007
时间:
2016-1-26 15:47
学习一下
作者:
hhqzoe
时间:
2016-1-28 16:27
谢谢
作者:
15063363804
时间:
2016-2-16 09:42
看看
作者:
wf78365421
时间:
2016-2-16 16:40
gggggggggggggggggg
作者:
fengmengujing
时间:
2016-2-23 17:48
谢谢分享~
作者:
zuming
时间:
2016-2-24 13:32
学习
作者:
小白yzq
时间:
2016-3-9 10:49
想看
作者:
小白yzq
时间:
2016-3-9 10:50
没有免费观看的吗
作者:
ppcl2
时间:
2016-3-9 11:04
转染选择指南和转染决策
作者:
bio-bin
时间:
2016-3-9 11:19
看看，学习！
作者:
iytbxxg
时间:
2016-3-10 14:24
LOOK
# s1 P, l6 D2 h" T8 B5 ~3 P# j- F
作者:
小白与大黑
时间:
2016-3-10 22:31
马上要学习转染了 谢谢楼主的资料
作者:
duwenjing
时间:
2016-3-23 13:56
谢谢
作者:
lccsiais
时间:
2016-3-24 09:49
谢谢分享
) b( _ e7 h" ]# u [) V" z) y+ F2 g8 T
作者:
riverdtang
时间:
2016-3-24 14:42
作者:
alpha920
时间:
2016-3-27 11:09
学习一下
作者:
Diane0321
时间:
2016-3-28 08:59
谢谢
作者:
maokai345
时间:
2016-4-4 11:33
来看一看
作者:
限弓5829
时间:
2016-4-6 23:04
学习下
作者:
wuhuaguo88l
时间:
2016-4-7 06:03
作者:
rope
时间:
2016-8-24 11:29
试下新手能下不
作者:
蜡笔71
时间:
2016-9-8 13:01
1....
作者:
chang-514
时间:
2016-9-14 16:08
看看
作者:
wangxiang
时间:
2016-9-17 21:17
谢谢
作者:
Quiet
时间:
2016-9-22 08:56
学习
作者:
nichifanlema2
时间:
2016-9-22 09:01
xiexie
作者:
xiepu1
时间:
2016-9-26 09:12
又下不了的文献
作者:
zhengjianwei521
时间:
2016-9-28 11:52
1212121212112
作者:
veda327
时间:
2016-10-14 11:48
kankan ruhe !
作者:
niliu730323143
时间:
2016-11-16 08:55
好东西
作者:
strainf
时间:
2016-12-12 14:43
$ s* Y/ y5 L" ], x$ v
非常感谢
作者:
田甜
时间:
2017-1-17 09:07
看看
作者:
Albertchen
时间:
2017-1-17 15:31
谢谢分享
作者:
ljl1988115
时间:
2017-2-28 11:36
xzxxxx
作者:
秋水度
时间:
2017-4-19 11:18
借鉴一下！！！！！！！！！！！！！！！！！！
作者:
alicia_86
时间:
2017-4-19 14:30
kankan
作者:
ltickp
时间:
2017-4-20 08:57
看看
作者:
tingwuyu
时间:
2017-7-20 15:31
谢谢
作者:
hengton
时间:
2017-7-30 15:30
学习一下
作者:
mingge1987
时间:
2017-8-2 16:07
学习
作者:
wca66
时间:
2017-8-18 13:20
xiexie
作者:
wca66
时间:
2017-8-18 13:27
作者:
毛球
时间:
2017-8-18 13:48
谢谢
作者:
crazyspy
时间:
2017-8-23 10:45
睇下咩来的
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