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标题: CIK细胞培养过程中CD3+是先包被在培养瓶上好呢？还是在培养过程中加？ [打印本页]

作者: luoan 时间: 2015-8-6 15:13 标题: CIK细胞培养过程中CD3+是先包被在培养瓶上好呢？还是在培养过程中加？

我在做CIK细胞，我们的CD3+是包被在培养瓶上的，这样有什么好处，为什么不直接在培养过程中加？

作者: 刘彩云 时间: 2015-8-7 08:54

CD3的作用就是激活，包被了瓶子可以进均匀的激活细胞，这样还不进入细胞。

作者: 小刘 时间: 2015-8-7 12:43

包被就是给它创造良好的培养条件，细胞一般贴壁生长速度较快，并且能更好的用包被因子去诱导，所以包被这步骤很重要，一般都需要提前操作，至少包被2小时以上，如果直接加，可能增殖的数目就达不到所需的量了，明白，细胞的的生理周期好好看一下，潜伏期，对数期，稳定期，凋亡期

作者: luoan 时间: 2015-8-7 13:21

回复小刘的帖子
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CIK是悬浮细胞，为什么要让他贴壁？

作者: momoenn 时间: 2015-8-8 10:39

你们培养过程一共用到几种因子呢？用你们的方法，10X10^8个细胞大约最终能扩到多少数量呢？包被和不包被我都做过，培养过程需要IFN-r，IL-2，CD3三种因子。包被的细胞前期在培养瓶中养的时候长的挺好，挺快；但是转袋后期增值，相对于不包被的细胞来说就差了一些。就整个培养阶段综合考虑，好像不包被的细胞要更好一些。希望大神们都说说自己的经验。

作者: cheeray 时间: 2015-8-10 10:36

目前培养不包被。。细胞状态挺好的。。包被的话没有做过。。

作者: 免疫与细胞 时间: 2015-8-10 11:06

包被会好一些，不过我们没做过。不知可否分享一下包被方法

作者: cneagle66 时间: 2015-8-10 11:11

我们是采用包被的办法，据说效果更好，是一个公司的成熟技术。但是自己没有比较过。

作者: 免疫与细胞 时间: 2015-8-10 15:43

回复刘彩云的帖子1 _( j# a, f& x0 v$ A
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请教一下如何包被培养瓶

作者: momoenn 时间: 2015-8-10 16:00

回复 cneagle66 的帖子
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能说说你们怎么包被的吗？

作者: luoan 时间: 2015-8-10 16:53

回复免疫与细胞的帖子
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直接用PBS或你用的培养基包被呀，我们就10ML培养液加你要包被的因子或抗体，室温过夜。

作者: 免疫与细胞 时间: 2015-8-10 17:02

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用CD3包被，浓度5μg/ml可以吗

作者: cneagle66 时间: 2015-8-12 15:30

具体浓度不知道，用CD3+单抗包被过夜。

作者: 刘彩云 时间: 2015-8-18 13:49

用CD3加生理盐水或者pbs包被，冰箱24h，培养箱4h

作者: hengton 时间: 2015-8-28 13:55

做过几次实验对比，不包被的效果好很多，原因：cik本身是悬浮细胞，不铁壁；细胞制备工艺上，是使用培养袋扩增的，包被不了。

作者: Sarge 时间: 2015-8-31 09:22

我们这边实验结果是包被和不包被情况差不多，另外包被也不是要CIK细胞贴壁生长，但是细胞会自然沉降，结团的时候更会如此，所以包被只是培养的手段之一，但是包被会浪费一些因子，考虑成本还是滴加的好。

作者: lingfei 时间: 2016-5-30 11:25

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你好，想请教一下包被的问题。包被以后CIK会贴壁生长对吧，我们需要把上清倒掉吗，细胞还要消化吗？

作者: 18627000462 时间: 2016-5-30 11:52

没试过包被的方法，一直使用的是未包被的方法，一般一份CIK养到15天的数量在5*10^9左右，不知道大家的到15天数量是多少，可以给与我们参考下

作者: shuimiao327 时间: 2016-5-31 13:35

不包被，过程中直接滴加

作者: lingfei 时间: 2016-5-31 13:38

本帖最后由 lingfei 于 2016-5-31 13:42 编辑

回复 18627000462 的帖子- R9 k( T0 }" O: i+ W

细胞扩增后的数量也和开始培养时的细胞数有关，你15天的细胞数很多了，需要看扩增倍数的吧，你是怎么培养的？可以交流一下吗？

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