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标题: DC细胞培养求助 [打印本页]

作者: simed 时间: 2015-8-12 11:03 标题: DC细胞培养求助

培养DC细胞时什么时候贴壁什么时候开始不贴壁？贴壁后搜集悬浮的细胞用于后续CIK培养时杂细胞多有何影响，如何去除

作者: colins 时间: 2015-8-12 14:51

我们是把单个核细胞接种后培养4小时后就认为里面的DC细胞都贴壁了，至于什么时候不贴壁，这个不好说，随着细胞的生长程度不同，每次换液都有细胞从底部脱落，应该是成熟了，呵呵，回答的不好，希望对你有帮助

作者: chenguangyu 时间: 2015-8-12 16:51

一般DC都不贴壁，成熟的是会漂起来。贴壁的是DC的前体细胞，即单核细胞。在单核细胞又到成DC的过程中，细胞逐渐会漂起来。当然在实际培养过程中，肯定会有一小部分细胞因为各种原因没有漂起来。单核细胞贴壁速度非常快，1个小时甚至半小时就铁壁了。在实际操作中为了获取更多的贴壁细胞，我们往往会多贴一会。

作者: cheeray 时间: 2015-8-13 15:47

最开始的时候，单核细胞贴壁，移液枪吹打一下。淋巴细胞就拿来培养CIK了。。加入因子之后，慢慢的成熟会悬浮起来的。

作者: mkhorse 时间: 2015-8-15 16:50

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贴壁的时间延长，不一定会获得更多的贴壁细胞的哦

作者: yuanyecat 时间: 2015-8-18 12:43

本帖最后由 yuanyecat 于 2015-8-18 12:44 编辑

开始加INF，24小时后不贴壁的是CIK，贴壁的是DC.你分开培养就好了，但是DC成熟后有部分不会贴壁，你不能把不贴壁的也丢了

作者: 暖羊羊 时间: 2015-8-18 14:47

前期从白膜层中提取单个核细胞，然后接种至培养瓶中静置3h，悬浮部分接种于另一瓶中用于CIK培养，用滴管滴洗后贴壁部分即为DC细胞的前体细胞单核细胞（Mo），进行DC细胞的诱导和促成熟，随着DC的诱导和促成熟细胞贴壁能力会逐渐减弱慢慢悬浮，促成熟24h后收集获得成熟DC细胞。我们后来流式分别检测了培养瓶中贴壁和悬浮部分细胞，发现贴壁部分也绝大多数是成熟期的DC细胞，所以我们后来通常会收集完悬浮细胞后再用细胞刮轻轻刮取收集贴壁细胞。希望对你有所帮助。

作者: 小刘 时间: 2015-8-23 12:15

DC前体细胞主要负责免疫递呈，变形能力和吸附能是行使该功能的关键。因其细胞的强大变形能力和细胞表面丰富的蛋白、糖蛋白，所以极易吸附。贴壁生长也不奇怪了，这个没有时间规定，患者的细胞活跃性是其确定脱离时间的关键，其实脱离了也能当免疫细胞养啊，两者间不冲突，也没有影响

作者: 鸵鸵 时间: 2015-8-24 09:47

回复暖羊羊的帖子8 k# c( z( U' ] z; h3 P; Z. B

我们在DC培养时也会遇到一些困扰，在后期培养过程中，会逐渐的悬浮起来，通过换液来添加细胞因子，又怕会损失掉DC细胞，而且巨噬细胞的干扰有时候导致无法辨别到底是不是成熟的DC细胞，DC细胞的增殖并不明显，这导致回输时DC细胞的量过少，影响病人的回输质量，各位大神有没有什么好的解决办法

作者: hengton 时间: 2015-8-26 10:42

回复鸵鸵的帖子
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这个可以通过工艺避免，你可以采用半量换液的方法，将换掉的液体加入cik细胞培养基里。

作者: zgzy 时间: 2015-8-26 14:55

回复鸵鸵的帖子$ d: b0 v! a. W) f# t. `* G

可以用流式细胞仪检测一下，积累辨别经验。为减少细胞损失，可以分多次补加细胞因子，或者如楼上所建议，采用半亮或1/3换液的方法，具体量视原细胞培养液消耗状态而定，不见得必须按具体时间换液。

作者: zgzy 时间: 2015-8-26 14:59

CIK细胞是外周血单个核细胞分离所得，从梯度离心后的白膜中取得，经再次洗涤、离心、重悬后得到，所以楼主所提及的杂细胞主要源自于该步骤操作，小心吸取白膜，同时培养过程中DC会随着自身成熟度的改变慢慢悬浮起来，这时候收集到的基本就是成熟的DC细胞了，但还是会有一部分DC贴壁。

作者: 暖羊羊 时间: 2015-9-7 17:46

回复鸵鸵的帖子+ ^4 o M2 e1 e; Z! n0 M

DC细胞一般不会增殖，再说DC细胞的功能决定了它也不是以量取胜的，它相当于是雷达负载抗原给体内原有或者输进去的T细胞指引方向的；因为增殖能力较弱，可将换液改为半量补液，上清中的悬浮细胞离心收集后再添加到培养体系中；DC细胞不是一群纯的细胞系，它是以成熟DC为主的混合细胞，所以需要用流式指标来检测其纯度。

作者: 鸵鸵 时间: 2015-9-8 09:09

回复暖羊羊的帖子4 ^6 X9 g" h% ^- [7 q: P
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多谢赐教啦4 u( v5 {' ^$ b( N8 u

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