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标题: 免疫细胞分离时有大量脂肪 [打印本页]

作者: 小刘 时间: 2015-8-15 18:36 标题: 免疫细胞分离时有大量脂肪

分离单核细胞时，白膜层有大量脂肪，影响后续实验吗？

作者: CART 时间: 2015-8-15 23:42

我的目标是T淋巴细胞，分离出单核细胞后还有经过多步的分离纯化，到后面脂肪团就没了，没影响。

作者: a123567 时间: 2015-8-17 08:29

如果需要扩大培养，从培养瓶转入培养袋，在分离时脂肪较多，将会影响吹洗贴壁细胞，很难洗脱下来。

作者: 免疫与细胞 时间: 2015-8-17 09:23

影响，抽血时一定要嘱咐空腹，这样就不会有脂肪了

作者: baby00000003 时间: 2015-8-17 13:52

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如果全血离心时多用PBS洗几次，这种脂肪颗粒会不会慢慢就没有了？

作者: CART 时间: 2015-8-17 15:42

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分离时我是严格按照淋巴细胞分离液的说明书操作的，说明书是几次就几次，没有自己调整。建议淋巴细胞分离液用进口的，我用的是Sigma的，好的还有罗氏的，买不起啊

作者: baby00000003 时间: 2015-8-17 15:58

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说到分离液，自己用hespan＋ficoll，分步加入效果也不错哟～
感觉hespan是需要一定时间包裹红细胞的～

作者: cheeray 时间: 2015-8-18 17:10

多用生理盐水洗涤。。看看效果。

作者: 鸵鸵 时间: 2015-8-20 16:20

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生理盐水和PBS洗涤有什么区别吗？哪个更好用

作者: 老姜 时间: 2015-8-21 17:03

分离细胞时有白膜层有大量的脂肪，对培养细胞的生长有影响。离心后脂肪常浮在血浆层的上方，这时应该用吸管将脂肪层吸弃，一般采用点状吸法尽量吸去脂肪，这时需将吸脂肪的吸管弃去，更换新管吸白膜层。

作者: 老姜 时间: 2015-8-21 17:12

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分离细胞应该用PBS更好。因为生理盐水仅是等渗液，而PBS是平衡盐液，具有维持细胞渗透压，维持细胞的pH等作用，所以在处理细胞时更易用PBS。

作者: zgzy 时间: 2015-8-25 11:05

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个人感觉生理盐水更好呀一些，理论上讲应该区别不大。分离液的话用的进口 Ficol，其他的没用过，感觉还不错

作者: Sarge 时间: 2015-9-1 11:58

脂肪细胞跟白膜层很容易混在一起，没什么好办法处理，只能一起吸入做培养处理，感觉在哦培养过程中没什么影响。另外，觉得多用生理盐水或者PBS洗涤会增加细胞在外暴露时间，对细胞培养不利。还有就是医嘱采血时可以少量进食，但不能吃油腻食物，尽量少饮水。

作者: Anne_Yu 时间: 2015-9-4 08:40

我们做的时候也遇到有些分离出来有脂肪的，感觉对后续培养的影响不大。有些病人第一次做的时候会有很多脂肪，后面做就不会了，不知道什么原因。

作者: 杨知涵 时间: 2015-9-14 15:24

在吸白膜层的时候，尽量不要吸进太多的脂肪，细胞比较多的话，剩余一点混着脂肪的细胞就舍弃吧。吸出来的脂肪，在洗涤时，有的会沉到离心管的底部，可以将上面的细胞悬液转入另一个干净的离心管，这样也可以去掉一些脂肪。

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