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标题: 人脐带间充质干细胞求助 [打印本页]

作者: 冰冻瞬间 时间: 2015-8-21 09:51 标题: 人脐带间充质干细胞求助

本帖最后由冰冻瞬间于 2015-8-21 09:52 编辑 ( r8 B+ y; ]& H8 g

我做了一批人脐带间充质干细胞，细胞状态都是不错的，我测了8个表型，CD105，CD73，CD90，CD45，CD34，CD14，CD79，HLA-DR,其中CD73，CD90 95%以上，CD45，CD14，CD79，HLA-DR在2%以下，但是CD105测了几次有时90%以上，有时就50%左右，CD34也是，有时低2%，有时30%左右，这是为什么，哪位高手帮我分析下，图我这上传不了，谢谢了

作者: hitmanc 时间: 2015-8-21 13:05

脐带来源的间充质干细胞基本不可能CD34高到30%，肯定是流式检测出的问题，你自己排除下吧。

作者: ych123 时间: 2015-8-21 20:21

回复冰冻瞬间的帖子4 X7 {9 d% a. @9 C5 h- }
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亲，你的脐带间充质干细胞怎么养出来的啊，可以传授点经验吗，我都养了一个月了，还没啥结果，我养出来了也要做坚定

作者: ych123 时间: 2015-8-22 12:42

回复冰冻瞬间的帖子
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楼主能帮我看看我的细胞吗，，急急急

作者: zhangmingqi111 时间: 2015-8-22 20:55

你是什么代次做的流式，P4-P5一般CD105都会在90%左右，大约P6貌似105就低

作者: 冰冻瞬间 时间: 2015-8-23 14:39

本帖最后由冰冻瞬间于 2015-8-23 14:39 编辑 / D2 l$ `9 a o1 J: G
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回复 hitmanc 的帖子% X6 D9 }: _5 l8 S4 G) } V" H

谢谢，我APC标记的，我现在找到问题，标记后洗一遍30%，洗两次后就5%左右，在洗就将到2%以下了，所以这个抗体出问题了，换了抗体就好了- G* ^4 I4 c7 N* j' {

作者: axiazhuang 时间: 2015-8-24 11:00

回复 ych123 的帖子
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你是不是原代MSC就没有养出来？无菌剪碎或者镊子撕下脐带胶质，均匀贴附到皿或者瓶底，加入含干细胞因子的基础培养基（全培养基），第4-5天可以换液，7天左右会有组织块周围爬出细胞，一般11-12天后局部细胞密度会增多到融合率80%，才可以消化后传代。

作者: ych123 时间: 2015-8-24 11:57

回复 axiazhuang 的帖子
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哦，谢谢。我用的脐带血密度梯度离心提取的细胞，我想问一下用低糖的DMEM+10%胎牛血清，没有加生长因子和谷氨酰胺能养出来间充质干细胞吗，我看好多文献都加了

作者: colins 时间: 2015-8-24 13:13

脐带间充质干细胞很容易培养，而且表型也比较稳定，你其他指标和合适的，基本上你培养的问题也不大，可以试着考虑换一台流式细胞仪，因为如果是一些轻便的流式细胞仪，比如BD的C6等做出来的结果又是就是不是很稳定，我就遇到过，只是我的是CD73不稳定，在其他流式细胞仪上试试吧，排除仪器的问题以后再找原因。

作者: 冰冻瞬间 时间: 2015-8-24 16:40

回复 colins 的帖子- a9 E: `! a1 k4 c7 E5 y: u

谢谢了，现在问题已经解决了

作者: ych123 时间: 2015-8-24 19:37

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我提了几次了都没成功，每次都是里面感觉有很多圆形细胞，梭形细胞较少，有什么办法解决吗，谢谢

作者: colins 时间: 2015-8-25 16:04

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应该是混进去血管内皮细胞了吧，以后分离胶的时候注意一下，如果不多的话，多传几代应该就没了

作者: ych123 时间: 2015-8-25 17:14

回复 colins 的帖子; o# _% x) w$ K6 w. h

我是用脐带血分离的，，做了几次了，都差不多，希望传代可以去掉

作者: colins 时间: 2015-8-26 13:14

回复 ych123 的帖子% O. {, |7 ]5 V! z3 @
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脐带血分离间充质干细胞？那确实很麻烦，里面存在的间充质干细胞本来就不多，这个就没做过了。没法提建议

作者: ych123 时间: 2015-8-26 14:12

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恩，好的，谢谢，，我在摸索摸索

作者: wuhuaguo88l 时间: 2015-9-8 07:55

很可能是流式操作问题，流式设门是需要经验的。

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