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标题: 有做过小鼠胚胎干细胞电转的战友吗？ [打印本页]

作者: LuXK 时间: 2015-8-31 10:31 标题: 有做过小鼠胚胎干细胞电转的战友吗？

打算用伯乐电转仪电转cas9质粒到mESCs中，请问有做过的战友吗？细胞数，质粒的量和电转参数是怎么样的？非常感谢！

作者: iseeyou1210 时间: 2015-9-1 10:07

240-260V, 500uF 电转
或者是直接用lipofectamine 2000都可以。

作者: LuXK 时间: 2015-9-7 09:11

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谢谢，细胞数和质粒的量分别是多少呢？

作者: iseeyou1210 时间: 2015-9-10 17:43

细胞数一般是10million，质粒5ug足以，我用过2，5ug的，也有很多positive clone r9 a6 h* x0 R( @

作者: 蒋春英 时间: 2015-9-16 15:11

请问电转条件敲除的质粒入小鼠胚胎干细胞，230V, 500uF，电转时间有15ms，这样是不是一次失败的电转呢？电转时间偏长可能的原因是什么呢？谢谢啦

作者: 细胞海洋 时间: 2015-9-17 12:35

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作者: 缥飘实验员 时间: 2015-9-18 18:45

回复 iseeyou1210 的帖子4 g: {; G. z& n: R
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请问电转前需要高密度传代么，比如，100mm 皿，平时是1*10^6 传代，电转前一天按 5*10^6 传代，第二天消化了电转，电转的一些具体参数还请指教下。

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