干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。
[打印本页]
作者:
ych123
时间:
2015-9-15 23:01
标题:
最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。
最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，
作者:
swtarron
时间:
2015-9-16 08:45
你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？
作者:
121qwq
时间:
2015-9-16 09:32
骨髓间充质呢？同问
作者:
ych123
时间:
2015-9-17 15:04
回复
swtarron
的帖子
0 W! ]- I9 I- X, Y/ G2 W; z
! r7 w, K) D7 p+ ?3 T2 W
这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了
作者:
edwardellen
时间:
2015-9-22 21:31
想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。
2 h; x9 g0 n) N/ K3 s" p2 Y
看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。
7 V/ ?8 A. n+ q" `
先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。
9 G* e! ~5 ~: ~% q7 t* F
这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。
5 H6 `7 _5 r4 e/ A6 q3 _0 X5 l
染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。
( I, f0 @) @3 Y% L( D! O( v' B& l
买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。
; s) J! {8 h# M2 O) S- c8 X6 n
做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。
作者:
ywx6302706008
时间:
2015-10-24 18:18
内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准
+ z% z, ~% \7 @
M Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317
4 n1 R, ?( x+ H
: {: {7 X- F0 ?2 A" i
4 Y S6 U4 @% k0 H9 C
间充质干细胞国际捡测标准
! C4 N4 V4 |" L& x
1. 可在塑料培养器皿上贴壁,
3 S- W/ P- t& o4 k
2. 细胞表型
; U* O: A/ R+ P5 Y2 m$ q
正 (≥95%+) 负 (≤2%+)
$ v. s0 R, }, G: Z
CD105 CD45
$ F/ y1 J* A. W6 \
CD73 CD34
+ T" X1 R, E3 H. ~
CD90 CD14 or CD11b
! _' R$ X. e' ~# C! K
CD79a or CD19
" v+ ]# k) z6 t
HLA-DR
( c4 b* |2 G* ^* Q
3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化
作者:
ych123
时间:
2015-10-26 16:41
回复
edwardellen
的帖子
9 `8 S$ y1 q; t& e9 z! p5 {
% ^6 L! p. ?" T6 d# c
你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊
作者:
ywx6302706008
时间:
2015-10-30 15:02
买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染
作者:
小云龙
时间:
2015-11-5 22:42
准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73 CD 105 CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标
1 }5 r% ~" T% Y" h* h: t) o
作者:
ych123
时间:
2015-11-25 17:19
回复
edwardellen
的帖子
$ |7 T/ _' f5 G7 Q4 N& @
& M! W. ^7 f1 n3 B3 f: _# c6 c
你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢
作者:
luyue6453
时间:
2016-6-1 15:42
回复
ych123
的帖子
2 I, b& a% K x" ^
& E; s. z& W- y' a! L" k
BD公司有一款检测间充质干细胞的试剂盒用起来很方便，我之前买的就是那么，一万多块钱，我现在还剩好多
作者:
Tonypan
时间:
2019-9-11 11:04
回复
edwardellen
的帖子
9 w( x$ q2 H9 {3 Q7 g$ b# d
{% q! k6 O0 S
好专业
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5