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标题: CIK细胞培养0、4、7、10、14天分别是什么样的？ [打印本页]
作者: 地球外世界    时间: 2015-9-17 15:55     标题: CIK细胞培养0、4、7、10、14天分别是什么样的？

CIK细胞培养0、4、7、10、14天分别是什么样的？
作者: 小刘    时间: 2015-9-18 10:44

细胞变大，细胞变多呗，没个啥样子
作者: cheeray    时间: 2015-9-22 09:19

自己培养一下。。显微镜下拍照就晓得了。。
作者: j1370033569    时间: 2015-9-22 09:35

红细胞慢慢衰亡变少，可能到14天还有少量红细胞。有时（较多）第二天一些小的像杆状、椭圆的细胞会大量出现（具体组成不清，可能是幼稚细胞，也有说是血小板等），培养两天后会消失。细胞会聚团生长，个体形态圆形，大小较均一，根据数量密度补液就行。有的培养细胞形态不是很规则，多边形，拉长等，可能个体差异，多数较均一，圆形椭圆等。
作者: cg001    时间: 2015-9-24 11:28

楼上正解
作者: 本心    时间: 2015-9-27 11:00

红细胞会慢慢减少，每次补液的话都要加IL-2
作者: 地球外世界    时间: 2015-9-30 14:06

回复 j1370033569 的帖子
; Q, T2 D" G0 `- Y. I# t- f
; T7 f: M% m+ F6 _很详细，明确，谢谢
作者: 地球外世界    时间: 2015-9-30 14:06

回复 cg001 的帖子
, U2 I" o9 c$ Z/ U# E- h4 K' y2 v) S( O% W0 {( Q
嗯，我注意观察
作者: 地球外世界    时间: 2015-9-30 14:08

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$ g* e* q5 d2 A% m" ?7 b* U# B  q& h, F# Y& d: t$ u
换液补液时加白细胞介素，需要补加血浆吗？
作者: 地球外世界    时间: 2015-9-30 14:12

回复 小刘 的帖子% J$ q" e1 H. M% q, _; t, E

& J! J  u9 O! Z+ I  h. v% ]8 m6 f0 ^我培养的是CIK细胞，在初次转瓶，培养一两天时是沉降贴壁于培养瓶底部，再渐渐浮于细胞悬液中。细胞早期有长梭状和圆形，到后期才会有大部分圆形。期间会聚集成团。我想知道具体培养到某一天，会有哪些较为标准的细胞形态，作为对比参考？
作者: 本心    时间: 2015-10-1 18:11

回复 地球外世界 的帖子, ]" a9 \; L. P7 h& v

* I& Q: T- A! w( ]( v6 b可以在D7加
作者: ganggangtry100    时间: 2015-10-8 16:37

CIK细胞培养0、4、7、10、14天分别是什么样的？？
. D1 T% K! {( L+ K7 o5 q: g3 t个人觉得应该从两方面来说：
5 r5 u* O" }" ~" b. ]1、细胞形态的改变$ |2 e0 U& i; {  Z. @
      红细胞、单核细胞等杂志逐渐减少，细胞由圆形变成不规则较长细胞
8 {% Q. s* w% @" N" m9 F5 W. `2、从细胞表型上
6 b# l0 Z1 L: J, f0 Q7 O8 g1 \8 f    随着抗体CD3的加入，培养中的CIK细胞的 CD3+细胞会从起始的20-30% 很快变为 90%以上，由于IL-2、干扰素等因子的加入，CIK的主要效应细胞CD3+CD56+细胞也会从原来的1%左右慢慢变为30-70%左右。
8 `; ~+ y+ m$ ?$ |   概括起来，CIK从原来0天的红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等一群复合细胞，变为以CD3+为主的一群异质细胞。
1 R" @, @& u7 A% Y5 @1 G5 Y   
作者: 地球外世界    时间: 2015-10-21 09:32

回复 ganggangtry100 的帖子5 w, V5 @1 J8 o0 ^7 ?
$ A) F3 d6 o2 u
非常感谢，解释的很清楚，明白问题在哪里了。我们现在能达到30-40%，如何能提高到70%？
作者: momoenn    时间: 2015-10-21 10:29

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: U& o5 W/ }. o1 w' Z
; I! G# `! e' y4 c& Q你这个变化就是对的
作者: 地球外世界    时间: 2015-10-26 11:36

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3 c' G& z" Y! N) d4 C+ H7 g! l5 H1 o0 Q2 A% t; y
变化，能详细描述一下你那里的实验培养情况吗？- L; k7 n# U1 j' W9 `6 u! ?6 ~2 @
作者: wuhuaguo88l    时间: 2015-10-26 13:54

刚开始几天，细胞集落会比较小，也比较少，大概在第三天后，细胞会变大变多；四五天后，根据培养基颜色可适当扩瓶培养。
作者: momoenn    时间: 2015-10-28 10:10

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9 w5 Q5 Z" t# J) z: q# i' f2 T3 }: n) K, J( ]0 @4 n" c/ \- o
我们CD3+比例很高，但是CD56+比例很低，基本在3%左右，大约可能是什么原因导致的呢？谢谢
作者: momoenn    时间: 2015-10-28 10:15

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$ k9 M4 ^5 t% T6 @3 `6 y4 ]9 P0 F3 L  P& ?7 j) ]0 m! d2 c' y
分离当天算1天，第1-3天贴壁细胞较多，第3天开始，细胞开始慢慢成簇，少量抱团，这时形态变化也开始体现，开始出现梭状或者角状的细胞，到第5-7天，细胞抱团达到顶峰，梭状或角状细胞也越来越多，慢慢地细胞开始散开，单个细胞越来越多。
作者: zhengjianwei521    时间: 2015-10-28 10:28

这个你自己显微镜下看看吧，说不好啊，就是数量形态的变化
作者: ganggangtry100    时间: 2015-10-28 11:14

回复 momoenn 的帖子5 a& B( a! h' z7 K

7 @; [: n) C. ]& w   不知道你用的因子，培养基和样本来源和具体培养的方法，不好直接给你出办法。
  t' Q. R% ]6 J" `' l9 u   现在CIK培养体系已经很成熟了，在网上搜集一下CIK培养方法，会有很详细的因子量的使用和培养基使用的，或者就用Schmidt Wolf 91年建立的经典的CIK培养方式，虽然有点老，但很不错，第0d，加入1000U/ml的人rIFN-γ，24h后，加入50ng/ml抗CD3和其他因子。每3d补充IL-2和新鲜培养基就可以。21天NKT 差的也得到20%了 6 _1 y$ q( o6 Y& F/ A$ t
  
作者: momoenn    时间: 2015-10-29 08:53

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$ v0 k. n) x! L/ Q1 p- I
* s8 Z* s% p5 e" ~我们用的X-VIVO15  加的因子是IFN-r ，CD3和IL-2。加培养基是看细胞状态加。有没有可能是我们的因子效价不够呢
作者: ganggangtry100    时间: 2015-10-29 12:33

回复 momoenn 的帖子: W  n7 ^' M+ D; l

7 f/ {" H, p# u6 cX-VIVO15  很好的培养基，你们CD3+细胞比较多，CD3抗体应该没有问题，看看IL-2和IFN-r在因子配置、保存上是否有失活（配置浓缩液-20度保存，平时工作液4度存放）可以尝试提高浓度或者三种因子一直添加，如果NKT还上不去，不要犹豫，换因子厂家吧~~~
作者: momoenn    时间: 2015-11-2 11:39

本帖最后由 细胞海洋 于 2015-11-5 09:44 编辑
8 M$ `( x! S3 }# W2 ^) W& o. f/ U& W4 V/ N7 j3 B
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; D! H6 N5 v' x' Y9 u2 A$ F7 C; h4 V# y7 y5 i% c& T& G
IL-2失活的可能性很小，IFN-r和你说的保存方法一样。IFN-r一直添加的话，不会对细胞造成杀伤吗？如果可以的话，能不能试下请教一下.先谢下了
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-4 11:46

回复 wuhuaguo88l 的帖子' W1 o# S! n2 P" }; n% M" {9 k
& |% ]7 ^2 f1 R4 \
谢谢
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-4 11:53

回复 momoenn 的帖子* Q/ y  z; f) r
. A5 P! ]& B3 r
非常感谢，培养阶段描述很详细，我再好好观察记录，观察是否与您的结果映照。
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-4 11:53

回复 zhengjianwei521 的帖子: Y) R; O: p# V/ w

7 l: X$ i) M" ~嗯，好的( j; y6 O: |0 a, r, }  [- C
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-4 12:00

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7 u2 o5 |- e# d  D) B% [. U7 j) Y+ c! ^. u8 a- K- A- H
嗯，好的，现在用的是GT551培养基，用至少提前一天CD3和其他因子先包被培养瓶，再进行细胞培养，后期补加白细胞介素。这样培养，细胞增殖还是很慢，还在找原因。您觉得问题会出现在哪里呢？
作者: ganggangtry100    时间: 2015-11-5 15:56

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5 t* x7 {* E2 [$ @6 G5 C5 x+ Q; L( R% N
  CIK培养基中如果细胞生长慢，主要关注CD3和 IL-2的问题，他们两个是刺激细胞活化和和增殖作用，rIFN-γ等主要是增加细胞杀生活性的。
  w3 y- K4 ~+ ?" p3 f   看看包被浓度和白细胞介素的量是否够或失活，如果足量，只要他们两个因子，用1640细胞都能很好的增殖。
作者: ganggangtry100    时间: 2015-11-5 16:08

回复 momoenn 的帖子# s, P8 v9 E5 Q- B% X9 x8 {# n

; h  J9 u& h) I; h2 Q" \  CIK培养基中如果细胞生长慢，主要关注CD3和 IL-2的问题，他们两个是刺激细胞活化和和增殖作用，rIFN-γ等主要是增加细胞杀瘤活性的。
/ J. b% B: n2 W; u   CIK本身也可以分泌rIFN-γ，个人认为不会对细胞造成不良影响。只是我的建议，各个实验室都有不同的培养方案，可以尝试一下。
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-9 10:49

回复 ganggangtry100 的帖子
" G* {) E% c6 }( g4 O( d; G3 G" j  @, D
嗯，非常感谢，我调节一下，试试
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-9 10:50

回复 ganggangtry100 的帖子
" T5 i" i, K4 y5 N( ^3 t
0 W$ }$ R$ l, o5 i$ @- o8 f$ V; a- E0 K好的，也准备换新的培养基和试剂，再试试
作者: 地球外世界    时间: 2015-11-9 10:50

回复 ganggangtry100 的帖子9 D4 o: V) ?4 a9 p% ^- Y0 D

- m6 D  O4 I, D9 ^: y- t& H- v非常感谢您的帮助
作者: guanjun1314    时间: 2015-12-11 10:55

培养的目标细胞会越来越多，其也的细胞如红细胞等都会慢慢凋亡，达到纯度高的CIK。至于形态就是多样的不规则的，显微镜观察
作者: 飞翔的烨    时间: 2015-12-11 14:02

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5 o7 }  J' h" ]/ p) ~
& U2 A" ]) C2 y' a% S我们为什么都没10%？求解
作者: 飞翔的烨    时间: 2015-12-11 14:18

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3 R3 }0 V' }1 u3 S+ x9 Z: l0 H3 k4 g8 K% N9 \3 ?1 s
前辈，我们用的是无血清培养基，但是11天了CIK细胞含量还不足10%，求高手帮忙
作者: 细胞海洋    时间: 2015-12-14 09:01

回复 飞翔的烨 的帖子
  ]  R+ B3 U# p+ L  x% B% W. t7 H. T7 ^( P' L/ r: Q; ~
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