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标题: 自体血清的获取 [打印本页]
作者: 醉心科研    时间: 2015-10-13 15:59     标题: 自体血清的获取

请教有经验的研友：
2 O0 i6 v% u. T0 Z免疫细胞培养中有时候会添加自体血清，都怎么得到的呢？
; M# f7 a, {- R1 Q5 a3 U1 单独用无抗凝剂的管取一管
4 i  s  K+ y4 h2 抗凝管取血离心后取上清
' v4 [, I! z* u0 F# B- [/ f2 p6 [* t
用1比较奢侈，我用2，但灭活发现变浑浊，高速离心也无法澄清。
4 H& k' S$ Y3 t有没有更好的处理方法？还是我的方法有不对的地方？
作者: wuhuaguo88l    时间: 2015-10-13 16:08

抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后续细胞培养。
作者: 醉心科研    时间: 2015-10-13 17:17

wuhuaguo88l 发表于 2015-10-13 16:08 ' }2 t) O+ m' N& \5 b9 Z
抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后 ...
, j9 |# }8 F" Q* F
很详细，多谢。8 ?" _' I9 U4 }5 F
跟我的差不多，但是我转速没你高。
/ X6 Z1 ]% i* ?7 ^/ P) _; Q灭活后我也离心去沉淀了，但是结果没有灭活前澄清了，你觉得可能是哪里的问题？
作者: ganggangtry100    时间: 2015-10-14 11:05

离心去除血细胞，取上清，灭活，可以很好的培养细胞，但该物质准确点说应该是血浆，不算是血清。4 b7 w9 @* m+ @0 h! j) S  c' V
因为血浆在灭活的过程中，很多蛋白会热变性析出，即便是高速离心，有些蛋白也是很难沉淀下来，你可以使用0.22um针头滤器过滤一下，立马和之前一样澄清了。
作者: roosevelt9999    时间: 2015-10-14 11:07

将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层的血清，密封好后，置于恒温（56度）的水温锅内30分钟，等时间到后，取出放于室内，等到室温后，再放于4度冰箱10分钟左右，取出以3000转，8分钟，升降都为9离心，即可得到比较清的血清。以后用之前，再离心一次，看看是否还有沉淀。一般这样操作之后，血清无沉淀。
作者: 醉心科研    时间: 2015-10-14 12:09

回复 ganggangtry100 的帖子
7 i8 J! T% d* g6 N: Y) h$ C! q9 \' Y9 y1 m1 X8 u# H
嗯，血浆。过滤是个办法，但恐怕滤器滤不了几毫升就堵了。
作者: 醉心科研    时间: 2015-10-14 12:09

本帖最后由 醉心科研 于 2015-10-14 12:10 编辑 - I4 Q/ \) j0 K! Y8 H
roosevelt9999 发表于 2015-10-14 11:07
& R% i- M& h' z1 @5 G+ ^将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层 ...

) E4 f$ }9 e( ^" k' s, A* s0 b, F# K4 L/ }8 `
非常详细，谢谢！我得好好试试。
作者: 3254938    时间: 2015-10-15 08:57

你要是觉得混。。可以考虑直接用盐水稀释全血，分PBMCs后取上清作为血浆用，常规灭活。。一般问题不大。。
, c* t3 g: P$ ?' Q3 s: r全血如果直接离心取得上清，没有灭活好，容易导致细胞前期出现一层的絮状物。。。损失大量细胞。。
作者: 醉心科研    时间: 2015-10-15 12:59

回复 3254938 的帖子0 T) E7 P+ A9 i. P2 I) ^" M
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临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不
作者: 御剑红尘    时间: 2015-10-15 14:14

对于血清灭活的问题，首先要搞清灭活的目的，选择56℃灭活不外乎是灭活可能存在的病毒或灭活补体物质。灭活过程中可每隔几分钟微微晃动利于充分灭活。然后是离心速度和时间的，曾经试过高速（约1000G）还是有悬浊物，这时可暂时不吸出上清，4℃冰箱过夜，悬浊物沉淀下去，小心吸到另外一个无菌容器即可。
作者: 3254938    时间: 2015-10-19 08:43

醉心科研 发表于 2015-10-15 12:59 8 e& Z% K3 x- |7 @, S6 s2 R
回复 3254938 的帖子
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3 j* w2 L. v0 \, c: n! j+ H5 P  h临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不

. F  L6 |: d, z+ I目前临床上大多用自体血浆，但是使用前一定要先灭活，至于灭活里面的什么成分，楼上有人回答你了，前期按5%的比例加，后期使用完了，细胞也长起来了
作者: momoenn    时间: 2015-11-10 10:35

浑浊也没事，起作用的蛋白已经变性了，只要你灭活到位，把浑浊的血浆加入培养液中培养没有问题。
作者: Anne_Yu    时间: 2015-12-7 14:37

第一天培养的时候会用抗凝管取血离心后取上清，后面补液加的血清是，细胞分离时的上清液取出来56度灭活得到的。
作者: guanjun1314    时间: 2015-12-8 11:50

血浆，56℃灭活30min,4℃冰箱30min,2000转/10分钟离心备用，4℃冰箱保存。



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